鈣網(wǎng)蛋白對(duì)鼻咽癌細(xì)胞EMT的影響.pdf

1、目的：本課題擬探討鈣網(wǎng)蛋白在鼻咽癌組織中的表達(dá)，并進(jìn)一步研究其對(duì)鼻咽癌細(xì)胞EMT的影響。
　　方法：
　　1.采用免疫組化方法檢測(cè)鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin）在鼻咽癌組織中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)的臨床意義；
　　2.構(gòu)建pcDNA3.1(+)/Calreticulin真核表達(dá)載體，采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE2細(xì)胞（以pcDNA3.1(+)載體為對(duì)照），通過(guò)Western blot檢測(cè)CNE2細(xì)胞中

2、Calreticulin的表達(dá)；
　　3.光鏡觀察Calreticulin高表達(dá)對(duì)CNE2細(xì)胞形態(tài)的影響，利用遷移侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Calreticulin高表達(dá)對(duì)CNE2細(xì)胞遷移侵襲能力的影響；
　　4.選用Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后鼻咽癌CNE2細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白Vimentin、MMP-9、TGF-β以及E-cad的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.Calreticulin在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為82

3、.69％（43/52），鼻咽部良性病變組織為19.29%（11/57），Calreticulin在鼻咽癌組織中表達(dá)顯著增高（P<0.05)；Calreticulin的表達(dá)率與鼻咽癌分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.457、r=0.382，P<0.05)。
　　2.轉(zhuǎn)染后鼻咽癌CNE2細(xì)胞中Calreticulin表達(dá)明顯升高，CNE2細(xì)胞的形態(tài)由扁平、鵝卵石樣上皮形態(tài)，逐漸演變?yōu)殚L(zhǎng)梭形、纖維細(xì)胞樣形態(tài)，呈現(xiàn)典型的EMT現(xiàn)象，且CN

4、E2細(xì)胞的遷移侵襲能力較對(duì)照組明顯增強(qiáng)（P<0.05)。
　　3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，Calreticulin在CNE2細(xì)胞中表達(dá)升高后，細(xì)胞中E-cad表達(dá)顯著降低（P<0.05)。而Vimentin、MMP-9、TGF-β三種蛋白的表達(dá)則顯著升高（P<0.05)。結(jié)果提示，Calreticulin表達(dá)升高能夠促進(jìn)鼻咽癌CNE2細(xì)胞發(fā)生EMT,增強(qiáng)鼻咽癌CNE2細(xì)胞的遷移及侵襲能力。
　　結(jié)論：Calre