球蟲實(shí)驗(yàn)-閆文朝

1、實(shí)驗(yàn)二、糞便中球蟲卵囊的計數(shù)、分離和孢子化培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)二、糞便中球蟲卵囊的計數(shù)、分離和孢子化培養(yǎng)技術(shù)（Countingisolationspulationtechnologyfcoccidialoocystsinfeces）【目的要求】【目的要求】認(rèn)識動物常見重要球蟲卵囊的形態(tài)特征；掌握糞便中球蟲卵囊的計數(shù)、分離和孢子化培養(yǎng)基本操作方法。這些操作是實(shí)驗(yàn)室開展球蟲研究最常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。【基本原理】【基本原理】卵囊通常存在于宿主糞便中，從糞

2、便中分離球蟲卵囊的方法有飽和食鹽溶液漂浮法、飽和蔗糖溶液漂浮法和飽和硫酸鎂溶液漂浮法，其中最常用的方法為飽和食鹽溶液漂浮法。其原理是懸浮溶液如飽和食鹽溶液密度高于卵囊密度，而低于糞便中大多數(shù)雜質(zhì)，經(jīng)離心或靜置沉淀后，大部分雜質(zhì)沉淀在容器底部，卵囊漂浮在懸浮溶液的表面，然后收集表層漂浮物；由于卵囊比重大于水的比重，所以表層漂浮物用自來水稀釋離心后，卵囊沉淀富集于離心管底部即可得到大量球蟲卵囊。計算球蟲感染強(qiáng)度即每克糞便中卵囊數(shù)量（oocy

3、stspergramOPG）和保存卵囊懸液中卵囊數(shù)量通常用麥克馬斯特法(McMaster’smethod)和血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法，應(yīng)用最廣泛的是麥克馬斯特法。麥克馬斯特計數(shù)法的原理是用飽和食鹽溶液作為懸浮溶液，把卵囊與比重較大雜質(zhì)分開，使卵囊漂浮至計數(shù)室表層，與計數(shù)室上層刻度部分處在同一層面上（或同一視野內(nèi)）；計數(shù)板上每個計數(shù)室容積為110.15=0.15mL（如圖1示），鏡檢計數(shù)0.15mL計數(shù)室內(nèi)卵囊數(shù)量，最后根據(jù)糞便克數(shù)和懸液稀釋倍

4、數(shù)計算OPG值或單位體積內(nèi)卵囊濃度。圖1麥克馬斯特計數(shù)板結(jié)構(gòu)示意圖麥克馬斯特計數(shù)板結(jié)構(gòu)示意圖而存在差異（如圖5所示）。泰澤屬孢子化卵囊：卵囊內(nèi)存在8個子孢子和卵囊殘體，無孢子囊結(jié)構(gòu)（如圖6所示）。2、球蟲卵囊的計數(shù)、球蟲卵囊的計數(shù)2.1糞便中球蟲卵囊的計數(shù)糞便中球蟲卵囊的計數(shù)—麥克馬斯特法麥克馬斯特法取2g新鮮雞糞便置于干凈的100mL燒杯內(nèi)，先加入8mL飽和食鹽溶液，用玻棒搗碎混勻，再加入50mL飽和食鹽溶液，混勻后立即用紗布或60目

5、篩網(wǎng)過濾，然后立即吸取濾液充滿2個計數(shù)室，在顯微鏡載物臺上靜置3～5min，在10倍物鏡下鏡檢計數(shù)，每個計數(shù)室內(nèi)有100個方格，其體積為1cm1cm圖5菲萊氏溫?fù)P球蟲卵囊菲萊氏溫?fù)P球蟲卵囊1.孢子囊；2.子孢子；3.殘體圖3艾美耳屬球蟲孢子化卵囊結(jié)構(gòu)示意圖艾美耳屬球蟲孢子化卵囊結(jié)構(gòu)示意圖1，極帽；2，卵膜孔；3，極粒；4，孢子囊；5，孢子囊殘體；6，卵囊殘體；7，子孢子圖4等孢屬球蟲孢子化卵囊結(jié)構(gòu)示意圖等孢屬球蟲孢子化卵囊結(jié)構(gòu)示意圖1，