gbt 18648-2002 非洲豬瘟診斷技術(shù)

1、GBT186482002前言非洲豬瘟(Africanswinefever，簡(jiǎn)稱ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病其特征為病程短，病死率高，臨床癥狀和病理變化均類似于急性豬瘟，表現(xiàn)高熱、皮膚充血、流產(chǎn)、水腫及臟器出血。為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織[WorldOrganizationforAnimalHealth(英)，OfficeIntentionaldesEpizootic(法)OIE]和我國(guó)規(guī)定的動(dòng)

2、物一類疾病。病毒在鮮肉和腌肉中能存活數(shù)月。ASF的實(shí)驗(yàn)室診斷分為兩類:第一類包括病毒分離、病毒抗原和基因組DNA的檢測(cè)第二類包括抗體的檢測(cè)。試驗(yàn)方法的選擇主要依據(jù)本國(guó)或本地區(qū)的疾病情況而定。在沒(méi)有ASF但又懷疑該病存在的國(guó)家，實(shí)驗(yàn)室診斷必須應(yīng)用無(wú)感染性的診斷方法，即應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)病毒基因組DNA和應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清抗體我國(guó)是無(wú)ASF國(guó)家，目前尚無(wú)ASF的檢疫方法。農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所于199年與美國(guó)梅

3、島動(dòng)物病研究中心進(jìn)行了ASF的無(wú)感染性快速檢測(cè)方法的合作研究，建立了適合于我國(guó)使用的由可疑感染動(dòng)物血液和內(nèi)臟器官中直接檢測(cè)ASFVDNA的PCR技術(shù)，以及檢測(cè)血清中ASFV抗體的ELISA方法。本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)這兩種方法技術(shù)要求作了規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B和附錄C都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:蔣正軍、王樹(shù)雙、尹燕博、蔡麗娟、郭福生

4、、陸明哲、孫淑芳、龔振華。Gsr186482002.0.1molL磷酸鹽緩沖液(制備方法見(jiàn)附錄Cl)，底物溶液(見(jiàn)附錄C2)操作方法3.3.1取EIASA微量滴定板，每孔加人用。ImolLpH7.2磷酸鹽緩沖液稀釋至工作滴度的抗原溶液50pL，封板后于4C作用16h(過(guò)夜)3.3.2用pH7.2的0.1molL磷酸鹽緩沖液洗板3次，每次2min3.3.3用含。.05Y吐溫一20的。.1molI磷酸鹽緩沖液溶液，將待檢血清以及陽(yáng)性和陰性對(duì)

5、照血清作30倍稀釋，將稀釋的血清加人用抗原包被的孔中，每孔中加50川J。13.4將滴定板放在微量振蕩器上，37C作用30min然后用。.1molL磷酸鹽緩沖液洗3次3.3.5每孔加人50pL用含0.05%吐溫一20的。.1moll磷酸鹽緩沖液配制的免疫球蛋白G(IgG)抗豬過(guò)氧化物酶結(jié)合物溶液3.3.6將滴定板放人振蕩器，37℃作用于1h，然后用。.1molI磷酸鹽緩沖液洗3次3.3.7每孔加50p1一底物溶液。3.3.8室溫下顯色15