1.人巨噬細(xì)胞金屬彈性蛋白酶在胃癌細(xì)胞及胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義;2.胃癌和結(jié)腸癌患者二氫嘧啶脫氫酶基因多態(tài)性與5fu代謝及臨床意義探索

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文1.人巨噬細(xì)胞金屬彈性蛋白酶在胃癌細(xì)胞及胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義;2.胃癌和結(jié)腸癌患者二氫嘧啶脫氫酶基因多態(tài)性與5-FU代謝及臨床意義探索姓名：章宏申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師：厲有名20060201浙江大擘博士學(xué)位論黨年8 月問胃腸外科和腫瘤外科胃癌住院手術(shù)病人。共5 8 例，其中男性4 3 例，女性1 5 側(cè)；年齡最大7 6 歲，最小3 2 歲，平均5 S ．5 ±l o ．6

2、多。所有胃癌意轡組織標(biāo)本均包攢j 猙癌組織、癌努組織、遠(yuǎn)處正常組織。標(biāo)本離體半小時內(nèi)采樣* 2 0 0 ℃液氮保存鑄用。2 ．纓璉壤券 霉薅緞瑰揀M G c ．8 0 3 、s o C ．7 粥l(xiāng) 、A G s 贍于中科院上海纓駐生物研究所。常規(guī)綱胞培養(yǎng)，培養(yǎng)基為R P M I l 6 4 0 細(xì)胞培養(yǎng)基( 美囡G I B C 0 公司)宓霪1 0 ％，l 、牛盤清( 轅翊器拳青公溺) ，零簇纓燕稱M G C ．8 0 3 、S 聰C

3、。7 粥l(xiāng) 、A G S在含1 0 ％小牛血清的培養(yǎng)液R P M I l 6 4 0 中，于3 7 ℃、5 ％C 0 2 條件下培養(yǎng)，每2 ～3 必傳代一次。取艇長狀態(tài)良好、達(dá)9 0 ％融合的鞠脆俸為磺究對象。3 ．R T - P C R 檢測H M E m R N A 表達(dá)總R N A 提?。喝∩鲜雠囵B(yǎng)細(xì)胞和三種組織標(biāo)本各1 0 0 m g 分別加入1 H z o ll m l ，破孬孳層熬纓魏窩碾耱螽豹緦織樣本分別轉(zhuǎn)移懋無鼢淞酶秘?zé)o

4、D N A 黲豹1 ．5 m l E p p e n d o r f 管，然后根據(jù)試劑說明書抽提R N A ，最后用D E P c 處理水溶解R N A 。提取茨憨賦A 經(jīng)絮辨勢必斃疫詩測定提聯(lián)物贅濃麓，O D 2 6 艙g e 魄僮在1 ．8 以．0 之刪。逆轉(zhuǎn)聚反應(yīng)；嗣上述簸瑾后樣本中據(jù)敬的2 隧總?cè)凇禔 在下述2 0 弘l 反應(yīng)體系中逆轉(zhuǎn)錄成c D N A ，該反應(yīng)體系組成如下：5 ×R T - B u 婦4 m ，o

5、l i g o d T ( 1 8 ) 2 ．5 岬o l ，Ll ¨l ，d N T p 5 m m o l 彪l 肛l 。R N A a s i n ( R N A 酶抑制劑) 2 0 U ，去離子求約1 3 恥l 。7 0 ℃預(yù)變鍵5 m i n ，然后熱入M ．M ￡v 逆轉(zhuǎn)錄酶2 0 0 u ，4 2 ℃孵育l l l ，7 2 ℃加熱1 0 m i n 滅活逆轉(zhuǎn)錄酶。愆R 反應(yīng)：取上述逆轉(zhuǎn)錄反殿產(chǎn)躲2 玲予2 0

6、堪轟應(yīng)搭軟孛遴囂p c R 反應(yīng)。反成體積組成如下：1 0 ×B u 舵r 2 肛l 、d N T P l O m m ／I ．O ．4 “l(fā) 、M g C l 22 5 m m o 肌1 ．4 叫、2 ．5 u 鞠淵A 聚合簿O ．5 瓣、模扳2 鷹、上、下游黲異雩| 魏2 啦o l 各e 。5 ≯l 、去褰子水1 2 ．7 “l(fā) 。引物序列為5 ’．T G G C c A T T C c l l ’A O G T c T