自凝集產(chǎn)氫新菌種的特性及其快速檢測.pdf

1、利用改進的Hungate厭氧培養(yǎng)技術(shù)，從活性污泥中成功分純到一株具有良好自凝集現(xiàn)象的產(chǎn)氫細菌YUAN-3。在液體培養(yǎng)基中YUAN-3形成較大的自凝集顆粒，直徑一般為0.5～5.0mm，最大時可達到1.5cm，培養(yǎng)基澄清。16SrRNA基因序列表明YUAN-3與最相近的ClostridiumcellulosiAS1.1777T(纖維素梭菌，L09177)的相似性為91.8％。生理生化特征和16SrRNA基因序列分析均證實YUAN-3為新屬

2、、新種。建議分類名為Ethanoligenensharbinense，模式菌株為YUAN-3T。 YUAN-3最適產(chǎn)氫的溫度為37℃；pH為5.0；C/N比為14；Mg2+濃400mg/L(MgCl2·6H2O)；Fe2+濃度為80mg/L(FeSO4·7H2O)。在最佳產(chǎn)氫條件下，通過發(fā)酵罐產(chǎn)氫實驗獲知34h達到最大產(chǎn)氫速率27.6mmolH2/g-drycell·h，30h達到最大比產(chǎn)氫率2.81molH2/mol-glu

3、cose。 對二甲苯是測定YUAN-3細胞表面疏水能力(CSH)的最適有機溶劑；菌懸液濃度為0.01g/mL，且與對二甲苯體積比為1：1是適合測定YUAN-3CSH的條件。在延滯末期(14h)和衰亡初期(38h)菌細胞的疏水率比較高，分別為82.4％和85.7％。溫度和pH對YUAN-3的凝集效果沒有顯著影響，但對CSH影響很大，可見YUAN-3的凝集機理比較復(fù)雜。YUAN-3也是一株產(chǎn)絮菌，其菌液可作為生物絮凝劑，絮凝率在6

4、7.0％左右。 根據(jù)YUAN-3的氫化酶基因(hydA)(DQ177326)序列設(shè)計了一組特異引物。經(jīng)過優(yōu)化后，確定本引物的最佳退火溫度為61.0℃。對3個DGGE檢驗的污泥樣品進行分析。證實了利用hydA特異引物RTF232/RTR382可以對復(fù)雜樣品中的Ethanoligenens細菌進行快速檢測。 上述結(jié)果表明，本研究分離的自凝集產(chǎn)氫細菌YUAN-3是未知的新菌種，該菌株具有高效產(chǎn)氫、凝集和絮凝能力，是一株具有