2,4-二氯酚的微生物降解及相關(guān)基因的克隆.pdf

1、從2,4-二氯酚生產(chǎn)廠排污口污泥中分離并篩選到兩株以2,4-二氯酚為唯一碳源和能源生長(zhǎng)、具有降解2,4-二氯酚能力的細(xì)胞GT241-1和GT141-2,經(jīng)鑒定確定它們都屬于假單胞菌屬(Pseudomonassp.).用60mg/L2,4-二氯酚對(duì)從杭州農(nóng)藥廠污水處理爆氣池取樣活性污泥進(jìn)行馴化,經(jīng)過15輪共一個(gè)月的馴化后,該活性污泥具有對(duì)2,4-二氯酚的抗性,經(jīng)沉淀后上層液體澄清,且獲得了降解2,4-二氯酚的能力.經(jīng)馴化的活性污泥在投加污

2、泥總量0.59﹪和1.18﹪(以干重計(jì))的假單胞菌GT241-1菌體后,對(duì)含2,4-二氯酚60mg/L和COD1500mg/L的模擬廢水進(jìn)行分批處理,結(jié)果表明該兩組活性污泥對(duì)2,4-二氯酚的降解能力沒有顯著差異.投加GT241-1菌體可加快對(duì)活性污泥反應(yīng)器的起動(dòng).通過Southern雜交,將菌株GT241-1的2,4-二氯酚羥化酶基因(dcpA)定位于約10kb的EcoRI/XbaI酶切片段.通過Southern雜交將菌株GT241-1

3、的3,5-二氯兒茶酚1,2-雙加氧酶基因(dcpB)定位于約12kb的EcoRI酶切片段、約16kb的XbaI酶切片段、或約11kb的EcoRI/XbaI酶切片段.從杭州農(nóng)藥廠污水處理廠爆氣池中分離篩選得到一株性能良好的細(xì)菌,命名為SS1-6.將攜帶完整dcpA基因片段的質(zhì)粒pBS1-12用HindⅢ酶切后克隆至革蘭氏陰性菌表達(dá)載體pKT230,獲得RBSK1-1等幾十個(gè)轉(zhuǎn)化子.經(jīng)酶切驗(yàn)證和PCR驗(yàn)證,證實(shí)dcpA基因已連接到表達(dá)載體p