多糖技術(shù)路線圖

1、Molish反應(yīng)Fehling反應(yīng)鄰苯二甲酸-苯胺顯色反應(yīng)間苯二胺試驗3，5-二硝基水楊酸顯色法Somogyi-Nelson顯色法比阿耳（Bial）反應(yīng)本尼迪克（Benedict）試驗謝里萬諾夫(Сепиванов)試驗定量定性分光光度法離子交換色譜 氣相色譜法 凝膠電泳法高效液相色譜法苯酚—硫酸反應(yīng)顯色劑法與蒽酮-硫酸反應(yīng)樣品 樣品水提醇沉提 取堿提取法高溫水提取法超臨界提取法酶提取法 超聲波提取法微波提取法 超高壓提取法復(fù)合提取法多

2、 糖 粗 品溶劑處理法sevag法三氟三氯乙烷法 蛋白質(zhì)去除三氯醋酸法吸附劑離子交換柱色素去除 氧化劑透析法除無機(jī)鹽、單糖季銨鹽沉淀純化金屬絡(luò)合物法體內(nèi)外抗氧化性免疫調(diào)節(jié)活性抗腫瘤活性酶抑制活性抗菌活性抗凝血活性甲基化法高碘酸氧化反應(yīng) 化學(xué)分析法smith降解酸水解物理常數(shù)測定純 化分 離柱層析分離法沉淀法鉛鹽沉淀法銅鹽沉淀法鈣、鍶及鋇鹽沉淀法活性炭柱層析纖維素柱層析離子交換柱 層析凝膠柱層析超濾分離場解吸質(zhì)譜電噴霧質(zhì)譜電子轟擊質(zhì)譜生物

3、活性化學(xué)電離質(zhì)譜快原子轟出質(zhì)譜分子量測定 動態(tài)滲透壓法光散射法端基法 粘度法凝膠電泳法一級結(jié)構(gòu) 凝膠色譜HPLC法純度測定常用 常用單 一 多 糖紫外、紅外、結(jié)構(gòu)分析 核磁共振波譜 儀器分析法 法、HPLC、質(zhì) 譜法電泳酶法、免疫學(xué)法：生物分析法核磁共振波譜法、圓二色譜法：高級結(jié)構(gòu)色譜鑒別 電泳 薄層層析 超離心 色譜鑒別 法 凝膠層析淀粉柱層析、 淀粉柱層析、 凝膠柱層析） 凝膠柱層析）55 陰離子交換 陰離子交換色譜法 色譜法蛋白質(zhì)

4、的去除 蛋白質(zhì)的去除:用分級沉淀法得到的多糖，?；煊休^多的蛋白質(zhì)，必須予 用分級沉淀法得到的多糖，常混有較多的蛋白質(zhì)，必須予以去除。 以去除。 一般選擇那些使蛋白質(zhì)沉淀而使多糖不沉淀的試劑來處 一般選擇那些使蛋白質(zhì)沉淀而使多糖不沉淀的試劑來處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短，溫度低，避 理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短，溫度低，避免多糖降解。而要達(dá)到除盡游離蛋白質(zhì)的目的仍需反復(fù)多次處 免多糖降解。而要達(dá)到除盡游離

5、蛋白質(zhì)的目的仍需反復(fù)多次處理。除去蛋白質(zhì)的常用方法有： 理。除去蛋白質(zhì)的常用方法有：(1). (1). Sevag Sevag 法：根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿 法：根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿 CHCl CHCl3等有機(jī)溶劑中變性的特 等有機(jī)溶劑中變性的特點，用氯仿：戊醇或丁醇 點，用氯仿：戊醇或丁醇 5：1 或 4：1 混合液與糖提取物混合， 混合液與糖提取物混合，劇烈震蕩 劇烈震蕩 20 20～30min 30min，蛋白質(zhì)與氯仿 ，蛋白質(zhì)與氯仿-戊醇或

6、丁醇溶液形成凝膠 戊醇或丁醇溶液形成凝膠而分離，離心，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)。 而分離，離心，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)。這種方法在避免糖降解上有較好的效果， 這種方法在避免糖降解上有較好的效果，但效率不高， 但效率不高， 如能 如能配合加入蛋白質(zhì)水解酶 配合加入蛋白質(zhì)水解酶 （胰蛋白酶、 （胰蛋白酶、 胃蛋白酶、 胃蛋白酶、 鏈霉蛋白酶等） 鏈霉蛋白酶等） ，使蛋白質(zhì)大分子進(jìn)行一定程度降解， 使蛋白質(zhì)大分子進(jìn)行一定

7、程度降解， 再用 再用 Sevag Sevag 法處理， 法處理， 效果會 效果會更好。 更好。(2). (2). 三氟三氯乙烷法 三氟三氯乙烷法 F3C-CCl C-CCl3： 按多糖提取液： 按多糖提取液： 三氟三氯乙烷 三氟三氯乙烷 1：1 混合，在低溫下攪拌約 混合，在低溫下攪拌約 10min, 10min, 離心得上層水溶液，水層反復(fù) 離心得上層水溶液，水層反復(fù)用上述方法處理幾次，即得無蛋白質(zhì)的多糖溶液。此法效率高， 用上述方