鄰苯二甲酸二甲酯可視化免疫分析方法建立.pdf

1、本論文建立了三種檢測(cè)塑化劑鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)的可視化快速免疫分析方法，分別是膠體金免疫層析試紙條、量子點(diǎn)免疫層析試紙條和量子點(diǎn)免疫親和凝膠檢測(cè)柱，三種方法可以應(yīng)用于食品中鄰苯二甲酸二甲酯的可視化快速檢測(cè)。
　　采用戊二醛法合成鄰苯二甲酸二甲酯包被抗原(DMP-OVA)。鄰苯二甲酸二甲酯的膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)方法最佳工作條件為:膠體金粒徑為20nm;金標(biāo)抗體最佳pH值為9;最適抗體用量為20μg/mL;金標(biāo)抗體稀釋倍數(shù)為

2、1∶5;二抗和包被抗原的的稀釋液均為PBS緩沖溶液，稀釋倍數(shù)分別為1∶130和1∶3;硝酸纖維素膜型號(hào)為Milipore HF135s，并用乳粉溶液處理60min;樣品稀釋液為PBS。該試紙條方法檢出限為100μg/L，與其他種類塑化劑無交叉反應(yīng)，特異性良好。檢測(cè)時(shí)間小于10分鐘。樣品中鄰苯二甲酸二甲酯檢測(cè)限在100-500μg/L(μg/kg)。
　　采用活化酯法制備量子點(diǎn)標(biāo)記抗體(QDs-Ab)。鄰苯二甲酸二甲酯的量子點(diǎn)標(biāo)記免

3、疫層析試紙條檢測(cè)方法最佳工作條件為:量子點(diǎn)(QDs)與EDC與抗體的摩爾比為1∶1500∶10;量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的最佳pH值為8.4;樣品稀釋液為金標(biāo)工作液與PB(pH7.4)緩沖溶液的混合液，混合比例為1∶4; QDs-Ab稀釋倍數(shù)為1∶500;包被抗原稀釋倍數(shù)為1∶12;羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)為1∶220;硝酸纖維素膜型號(hào)為Milipore HF135s;結(jié)合墊用0.1％PEG200處理。該試紙條方法檢出限為50μg/L，與其他種類塑化劑

4、無交叉反應(yīng)，特異性良好。檢測(cè)時(shí)間小于10分鐘。樣品中鄰苯二甲酸二甲酯檢測(cè)限在50-150μg/L(μg/kg)。
　　采用活化酯法制備量子點(diǎn)標(biāo)記包被抗原(QDs-OVA-DMP)。鄰苯二甲酸二甲酯的量子點(diǎn)免疫親和凝膠檢測(cè)柱最佳工作條件為:量子點(diǎn)與EDC與包被抗原的摩爾比為1∶4000∶30;量子點(diǎn)標(biāo)記抗原(QDs-OVA-DMP)稀釋倍數(shù)為1∶800;樣品稀釋液為濃縮5倍的PB緩沖溶液;反應(yīng)時(shí)間為60s;清洗次數(shù)為5次。該檢測(cè)柱的