新型熒光試劑的合成及標(biāo)記方法研究.pdf

1、熒光衍生化方法是提高色譜檢測(cè)靈敏度的重要途徑。本論文以發(fā)展新型熒光試劑及標(biāo)記方法為目標(biāo)，制備了多種新型熒光衍生化試劑，并建立了相應(yīng)的HPLC分離分析方法。 采用量子化學(xué)計(jì)算方法，對(duì)咔唑和吖啶酮類熒光試劑分子進(jìn)行了幾何構(gòu)型優(yōu)化和熒光激發(fā)光譜計(jì)算研究。通過設(shè)計(jì)合理的反應(yīng)路線，制備了以咔唑?yàn)槟阁w熒光團(tuán)的新型羰基標(biāo)記熒光試劑-咔唑-9-乙氧基碳酰肼(CEOC-Hydrazide)，以二氟化硼-二吡咯甲烷為母體熒光團(tuán)的活性環(huán)氧基熒光試劑-

2、1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(4-氧基-(3-環(huán)氧丙基))-二氟化硼-二吡咯甲烷(TMEPBODIPY)，以及基于1，2-苯并-3,4-二氫咔唑熒光團(tuán)的標(biāo)記試劑-1，2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙基-對(duì)甲苯磺酸酯(BDETS)和1，2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙氧基碳酰肼(BCEOC-Hydrazide)。衍生反應(yīng)不僅快速、簡(jiǎn)單，而且可以顯著改善樣品的分離度和檢測(cè)靈敏度。 研究了新型羰基標(biāo)記熒光試劑，CEOC-Hy

3、drazide和BCEOC-Hydrazide，對(duì)糖醛類化合物的衍生反應(yīng)，并發(fā)展了相應(yīng)的HPLC分離分析方法。衍生反應(yīng)可在水浴中進(jìn)行；對(duì)甲醛的衍生反應(yīng)可在30min內(nèi)完成；糖類化合物和甲醛的衍生物平均檢出限分別達(dá)到35fmol和9.8fmol。 建立了羧基標(biāo)記熒光試劑BDETS和9-(2-羥乙基)-吖啶酮(HEA)對(duì)10種膽汁酸的柱前衍生HPLC分析方法。衍生反應(yīng)條件溫和；兩者與膽汁酸衍生物的平均檢出限分別達(dá)到8.3fmol和1

4、49.1fmol。 進(jìn)一步完善了咔唑-9-乙基氯甲酸酯(CEOC)作為實(shí)用熒光試劑對(duì)脂肪胺的衍生及HPLC的分離分析方法。衍生反應(yīng)可在5min內(nèi)完成；23種衍生物的分離僅需1h。此外，也將其應(yīng)用于芳香胺和酚類化合物的分析中，平均檢出限分別達(dá)到7.6fmol和162.4fmol。 將具有活性環(huán)氧基團(tuán)的熒光試劑TMEPBODIPY和3-環(huán)氧丙基熒光素(EPF)應(yīng)用于對(duì)蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記。通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)，證明了這兩種試劑可以對(duì)蛋白