新型熒光試劑的合成及標記方法研究.pdf

1、熒光衍生化方法是提高色譜檢測靈敏度的重要途徑。本論文以發(fā)展新型熒光試劑及標記方法為目標，制備了多種新型熒光衍生化試劑，并建立了相應(yīng)的HPLC分離分析方法。 采用量子化學計算方法，對咔唑和吖啶酮類熒光試劑分子進行了幾何構(gòu)型優(yōu)化和熒光激發(fā)光譜計算研究。通過設(shè)計合理的反應(yīng)路線，制備了以咔唑為母體熒光團的新型羰基標記熒光試劑-咔唑-9-乙氧基碳酰肼(CEOC-Hydrazide)，以二氟化硼-二吡咯甲烷為母體熒光團的活性環(huán)氧基熒光試劑-

2、1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(4-氧基-(3-環(huán)氧丙基))-二氟化硼-二吡咯甲烷(TMEPBODIPY)，以及基于1，2-苯并-3,4-二氫咔唑熒光團的標記試劑-1，2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙基-對甲苯磺酸酯(BDETS)和1，2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙氧基碳酰肼(BCEOC-Hydrazide)。衍生反應(yīng)不僅快速、簡單，而且可以顯著改善樣品的分離度和檢測靈敏度。 研究了新型羰基標記熒光試劑，CEOC-Hy

3、drazide和BCEOC-Hydrazide，對糖醛類化合物的衍生反應(yīng)，并發(fā)展了相應(yīng)的HPLC分離分析方法。衍生反應(yīng)可在水浴中進行；對甲醛的衍生反應(yīng)可在30min內(nèi)完成；糖類化合物和甲醛的衍生物平均檢出限分別達到35fmol和9.8fmol。 建立了羧基標記熒光試劑BDETS和9-(2-羥乙基)-吖啶酮(HEA)對10種膽汁酸的柱前衍生HPLC分析方法。衍生反應(yīng)條件溫和；兩者與膽汁酸衍生物的平均檢出限分別達到8.3fmol和1

4、49.1fmol。 進一步完善了咔唑-9-乙基氯甲酸酯(CEOC)作為實用熒光試劑對脂肪胺的衍生及HPLC的分離分析方法。衍生反應(yīng)可在5min內(nèi)完成；23種衍生物的分離僅需1h。此外，也將其應(yīng)用于芳香胺和酚類化合物的分析中，平均檢出限分別達到7.6fmol和162.4fmol。 將具有活性環(huán)氧基團的熒光試劑TMEPBODIPY和3-環(huán)氧丙基熒光素(EPF)應(yīng)用于對蛋白質(zhì)的熒光標記。通過對比實驗，證明了這兩種試劑可以對蛋白