簡(jiǎn)介：過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體是一種由致密分子構(gòu)成的類(lèi)固醇受體屬于由配體激活的Ⅱ型核受體超家族成員該實(shí)驗(yàn)擬運(yùn)用體外細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)上述問(wèn)題進(jìn)行研究以期為臨床上使用PPARS配體防治動(dòng)脈粥樣硬化提供更完善的實(shí)驗(yàn)依據(jù)方法1采用THP1單核細(xì)胞加佛波醇PMA40NGML培養(yǎng)1624H誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞加入OXLDL50UGML共同培養(yǎng)24H以上誘導(dǎo)分化為泡沫細(xì)胞應(yīng)用RTPCR測(cè)定PPARΑ、?；虮磉_(dá)加入PPARΑ配體CLOFIBRATE、PPARΓ配體PIOGLITAZONE進(jìn)行干預(yù)24H后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液用ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子IL6、TNFΑ及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2、MMP9濃度GELATINZYMOGRAPHY測(cè)定MMPS活性2誘導(dǎo)THP1分化為巨噬細(xì)胞加入胰島素01UM繼續(xù)培養(yǎng)分別于1H、2H、4H、8H、10H、12H、24H抽提細(xì)胞總RNA對(duì)PPARΓMRNA行RTPCR半定量分析以同一時(shí)段未加胰島素培養(yǎng)之巨噬細(xì)胞作對(duì)照巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成功后換用含3‰胎牛血清PRMI1640培養(yǎng)基分別加入胰島素025UM、05UM繼續(xù)培養(yǎng)48H提取總蛋白對(duì)PPARΓ行WESTERNBLOT檢測(cè)誘導(dǎo)THP1分化為巨噬細(xì)胞根據(jù)干預(yù)因子不同分組1單純巨噬細(xì)胞組2PIOGLITAZONE20UM組3PIOGLITAZONE20UM胰島素RIO25UM組4PIOGLITAZONE20UM胰島素RIO5UM組同時(shí)培養(yǎng)24H收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液ELISA法測(cè)定IL6、TNFΑ、MMP9濃度GELATINZYMOGRAPHY測(cè)定MMP9活性3誘導(dǎo)THP1單核細(xì)胞分化為巨噬、泡沫細(xì)胞加入PPARΑ配體CLOFIBRATE、PPARΓ配體PIOGLITAZONE進(jìn)行干預(yù)收集24H和48H細(xì)胞培養(yǎng)上清液用REALTIMEPCR、WESTERNBLOT分別檢測(cè)不同分化階段和不同干預(yù)條件下細(xì)胞的EMMPRIN基因和蛋白水平ELISA法測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP9濃度GELATINZYMOGRAPHY法測(cè)MMP9活性結(jié)論提示泡沫細(xì)胞中有PPARΑ、?；虮磉_(dá)PPARΑ、Γ配體均有利于抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊局部炎癥反應(yīng)PPARΓ配體還可降低基質(zhì)金屬蛋白酶的釋放并抑制其活性對(duì)增強(qiáng)斑塊的穩(wěn)定性有利胰島素對(duì)巨噬細(xì)胞PPARΓ基因、蛋白的表達(dá)均無(wú)顯著影響胰島素可消弱PPARΓ配體抑制巨噬細(xì)胞分泌IL6、TNFΑ、MMP9的作用推測(cè)胰島素對(duì)PPARΓ的活性可能存在抑制作用單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞的分化誘導(dǎo)EMMPRIN表達(dá)而進(jìn)一步向泡沫細(xì)胞分化對(duì)其表達(dá)無(wú)影響PPARΑ、Γ配體均可抑制EMMPRIN的表達(dá)下調(diào)EMMPRIN可能是PPARS配體抑制粥樣斑塊局部MMPS產(chǎn)生的機(jī)制之一

簡(jiǎn)介：猴病毒40SIMIANVIRUS40SV40是一種DNA腫瘤病毒在體外可以轉(zhuǎn)化細(xì)胞并誘發(fā)動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生腫瘤在人類(lèi)多種腫瘤中已檢測(cè)到SV40基因的存在和表達(dá)。SV40與人類(lèi)腫瘤關(guān)系密切它的致瘤性和轉(zhuǎn)化細(xì)胞能力主要與其編碼的早期蛋白T抗原TANTIGENTAG有關(guān)。SV40TAG能夠和抑癌蛋白P53和RB等結(jié)合并使之失活導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性增殖被認(rèn)為是SV40TAG致瘤發(fā)生的重要機(jī)制。SV40TAG可以整合入細(xì)胞基因組中破壞其結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性反式激活細(xì)胞基因的表達(dá)并啟動(dòng)宿主DNA的復(fù)制轉(zhuǎn)錄等。SV40TAG對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化起決定性作用與細(xì)胞增殖及腫瘤發(fā)生密切相關(guān)它可以誘發(fā)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物產(chǎn)生多種類(lèi)型腫瘤被廣泛用于腫瘤發(fā)生機(jī)制的研究。利用SV40TAG基因與組織表達(dá)特異性的啟動(dòng)子相結(jié)合已經(jīng)成功制備多種轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤模型。HKATPASE基因在胃壁細(xì)胞中特異性表達(dá)利用胃壁細(xì)胞特異性HKATPASEΒ亞基啟動(dòng)子建立SV40TAG基因轉(zhuǎn)基因小鼠胃癌模型可用于胃癌發(fā)病機(jī)制的研究同時(shí)為胃癌的預(yù)防和治療提供有力的工具。在以往研究的基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)將HKATPASEΒ亞基啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)SV40TAG基因的真核表達(dá)載體PCDNA31HKSV轉(zhuǎn)染入SGC7901、EC9706和KB細(xì)胞中通過(guò)G418篩選和擴(kuò)大培養(yǎng)獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。應(yīng)用PCR、RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測(cè)SV40TAG基因在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的整合與表達(dá)情況并且觀察SV40TAG基因的表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC7901生物學(xué)特性的影響探討SV40TAG的作用機(jī)制及SV40TAG基因表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系為進(jìn)一步轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的構(gòu)建奠定理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。材料與方法1質(zhì)粒的擴(kuò)增、提取和酶切鑒定提取質(zhì)粒PCDNA31、PCDNA31HKSV與PCDNA31SV利用限制性內(nèi)切酶酶切鑒定質(zhì)粒將質(zhì)粒用BAMHⅠ酶切瓊脂糖凝膠電泳鑒定。2細(xì)胞轉(zhuǎn)染利用脂質(zhì)體LIPOFECTAMIM2000將含有SV40TAG基因的真核表達(dá)載體PCDNA31SV和PCDNA31HKSV轉(zhuǎn)染入SGC7901、EC9706和KB細(xì)胞中用G418進(jìn)行篩選將獲得的陽(yáng)性細(xì)胞克隆擴(kuò)大培養(yǎng)得到體外穩(wěn)定傳代的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。3檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中SV40TAG基因的表達(dá)SV40TAG基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后從DNA、RNA和蛋白質(zhì)三個(gè)水平上檢測(cè)SV40TAG基因的整合和表達(dá)。提取轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因組DNA利用TAG基因特異性引物PCR擴(kuò)增檢測(cè)SV40TAG基因的表達(dá)提取細(xì)胞總RNARTPCR檢測(cè)SV40TAG基因MRNA的表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞中SV40TAG的表達(dá)。4檢測(cè)轉(zhuǎn)染SV40TAG基因的SGC7901細(xì)胞生物學(xué)特性變化MTT法檢測(cè)SV40TAG基因轉(zhuǎn)染前后SGC7901細(xì)胞增殖能力變化應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期分析。5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理SPSS100統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±S表示。應(yīng)用單因素方差分析進(jìn)行組間差異比較以Α005為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果1質(zhì)粒的酶切鑒定PCDNA31HKSV用BAMHⅠ單酶切電泳可見(jiàn)到約27KB與64KB兩條DNA條帶PCDNA31SV用BAMHⅠ單酶切電泳可見(jiàn)到約27KB與54KB兩條DNA條帶PCDNA31用BAMHⅠ單酶切電泳僅見(jiàn)到一條54KB的DNA條帶與預(yù)期結(jié)果相符可用于下一步的實(shí)驗(yàn)。2PCR各組細(xì)胞均可擴(kuò)增出443BP的內(nèi)參照GAPDH條帶PCDNA31HKSV與PCDNA31SV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SGC7901、EC9706和KB細(xì)胞均可擴(kuò)增出618BP的SV40TAG基因特異性條帶未轉(zhuǎn)染細(xì)胞與空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞均無(wú)此條帶出現(xiàn)。3RTPCR各組細(xì)胞均擴(kuò)增出443BP的內(nèi)參照GAPDH條帶PCDNA31HKSV與PCDNA31SV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SGC7901、EC9706和KB細(xì)胞均擴(kuò)增出272BP的SV40TAG基因特異性條帶未轉(zhuǎn)染細(xì)胞與空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞檢測(cè)不到此條帶。4免疫細(xì)胞化學(xué)染色PCDNA31HKSV與PCDNA31SV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SGC7901、EC9706和KB細(xì)胞中均檢測(cè)到SV40TAG的陽(yáng)性表達(dá)未轉(zhuǎn)染細(xì)胞與空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞無(wú)SV40TAG的表達(dá)。5MTT結(jié)果PCDNA31HKSV和PCDNA31SV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SGC7901細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖速度比未轉(zhuǎn)染細(xì)胞及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞明顯加快差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。6流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果PCDNA31HKSV與PCDNA31SV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SGC7901細(xì)胞中G1期細(xì)胞比例減少及PI指數(shù)增加與未轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞和空質(zhì)粒PCDNA31轉(zhuǎn)染組細(xì)胞相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。結(jié)論1PCDNA31HKSV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SGC7901、EC9706和KB細(xì)胞中SV40TAG基因穩(wěn)定表達(dá)。2SV40TAG基因的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染促進(jìn)SGC7901細(xì)胞增殖。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級(jí)密級(jí)博士學(xué)位論文線粒體融合素基因2粒體融合素基因2真達(dá)載構(gòu)對(duì)細(xì)真達(dá)載構(gòu)對(duì)細(xì)核表體建及其肝癌胞生核表體建及其肝癌胞生學(xué)為響研學(xué)為響研物行影及機(jī)制究物行影及機(jī)制究學(xué)請(qǐng)學(xué)請(qǐng)位申人位申人王堯?qū)W專(zhuān)業(yè)學(xué)專(zhuān)業(yè)科科學(xué)外科外科普外普外導(dǎo)教師導(dǎo)教師指指鄭啟鄭啟昌教授辯答日期答日期2008年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：為探討GCSF動(dòng)員的供體外周血中不同樹(shù)突狀細(xì)胞DC亞群的生物學(xué)特性，本文從下述兩方面進(jìn)行了研究。一、GCSF動(dòng)員的供體單核細(xì)胞來(lái)源的DO免疫生物學(xué)特性研究實(shí)驗(yàn)方法GCSF動(dòng)員的供體外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞貼壁后，在含IL4和GMCSF的無(wú)血清培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)7D，再用IL10、ATG和TNFA進(jìn)一步分組誘導(dǎo)2D。收集上清液及細(xì)胞，分別用流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、抗原吞噬實(shí)驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MLR測(cè)定各組DC的HLADR、CD1A、CD11C、CD40、CD80分子表達(dá)，IL12P70分泌，抗原吞噬功能以及同種異體反應(yīng)刺激功能。結(jié)論從GCSF動(dòng)員的供體外周血單個(gè)核細(xì)胞中可以誘導(dǎo)產(chǎn)生IDC，TNFA能誘導(dǎo)其分化成熟，IL10、ATG誘導(dǎo)可使其獲得致耐受的特性；與健康獻(xiàn)血員相比，GCSF動(dòng)員的供體外周血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的DC表型相對(duì)幼稚，同種異體反應(yīng)刺激能力較弱；盡管從GCSF動(dòng)員的供體PBMC中誘導(dǎo)產(chǎn)生CDLADC的效率不及未經(jīng)動(dòng)員的健康獻(xiàn)血員高，但因從動(dòng)員的供體外周血中可以采集到大量的PBMCS，因此，GCSF動(dòng)員的外周血有望成為不同DC的重要來(lái)源途徑。二、GCSF動(dòng)員的供體不同DC亞群免疫生物學(xué)特性的研究實(shí)驗(yàn)方法用免疫磁珠分離髓細(xì)胞來(lái)源的DCMDC和漿細(xì)胞來(lái)源的DCPDC，并分別用TNFA、CPG2006OND誘導(dǎo)為成熟MDCMMDC和成熟PDCMPDC。具體的研究方法如下1流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定各DC亞群的表型；2MLR測(cè)定不同DC亞群同種異體反應(yīng)刺激能力；3ELISA測(cè)定MLR培養(yǎng)上清液中INFΓ、IL10的含量，細(xì)胞內(nèi)流式術(shù)測(cè)定MLR后CD4T細(xì)胞的INFΓ和IL4分泌水平；4流式細(xì)胞術(shù)和RTPCR測(cè)定MLR后CD4CD25HIGHT細(xì)胞比例和FOXP3MRNA的表達(dá)。結(jié)論采集的供體外周血中兩類(lèi)DC亞群雖然HLADR高表達(dá)，但仍處于非成熟狀態(tài)，在合適的條件下分化成熟無(wú)論MDC成熟與否均表現(xiàn)出很強(qiáng)的刺激T細(xì)胞增殖能力，可以促進(jìn)使T細(xì)胞分泌IFNΓ增加，其分泌的增加可能是促進(jìn)向TH1極化的結(jié)果；PDC可能并不像MDC一樣有效地捕獲、處理和負(fù)載抗原到MHC分子上，因此呈遞抗原效率低，表現(xiàn)出對(duì)T細(xì)胞的弱刺激增殖特性；PDC雖然也可以促進(jìn)T細(xì)胞分泌IFNΓ的分泌，但似乎并非是通過(guò)TH1細(xì)胞分泌；PDC并不能促進(jìn)TH2類(lèi)因子IL4的分泌，對(duì)TH2的極化作用可能表現(xiàn)在IL10的分泌上；PDC有誘導(dǎo)CD4CD25HIGHTREG的作用。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文SV40大T抗原體外永生化視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及其生物學(xué)特性的研究姓名朱哲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師李永平20080510中山大學(xué)碩士學(xué)位論文SV40大T抗原體外水生化視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及其生物學(xué)特性的研究一、研究目的病例診斷視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤一例，組織塊法原代培養(yǎng)的視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，傳代后以SV40大T抗原將其永生化，擬建立視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，并進(jìn)一步研究其生物學(xué)特性。二、研究方法1、病例報(bào)告中山大學(xué)眼科醫(yī)院手術(shù)室切除的腫瘤標(biāo)本一例，用福爾馬林固定，石蠟包埋后切片，HE染色；免疫組織化學(xué)GFAP，VIM染色，光學(xué)顯微鏡鏡下觀察。2、同一例視神經(jīng)膠質(zhì)瘤，從中山大學(xué)眼科醫(yī)院手術(shù)室無(wú)菌取出帶到實(shí)驗(yàn)室，組織塊培養(yǎng)法體外培養(yǎng)視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，并傳代十代，應(yīng)用倒置顯微鏡和MTT比色法觀察瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況，用免疫組織化學(xué)染色，掃描和透射電鏡對(duì)瘤細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3、采用LIPOFECTOMIN2000法，將攜帶SV40大T抗原的質(zhì)粒TGLSLOXPHYTKCMVLT轉(zhuǎn)染入傳代培養(yǎng)至第十代的視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，HYGROMYCINB進(jìn)行克隆篩選，并反復(fù)傳代培養(yǎng)；MTT比色法觀察瘤細(xì)胞增值情況；細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)觀察瘤細(xì)胞的克隆形成能力；透射電鏡、免疫組織化學(xué)、RTPCR進(jìn)行鑒定。4、將轉(zhuǎn)染后的視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和人黑色素瘤細(xì)胞OCML在三維培養(yǎng)基3DCULTURE中進(jìn)行培養(yǎng)，HE染色形態(tài)學(xué)觀察。用RTPCR檢測(cè)血管內(nèi)皮相關(guān)基因，以人黑瘤細(xì)胞株OCM一1做陽(yáng)性對(duì)照，人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞株D一407為陰性對(duì)照。5、將轉(zhuǎn)染后的視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞放入無(wú)血清的限制分化培養(yǎng)基中，倒置顯微鏡下觀察，用免疫組化、免疫熒光以及RTPCR做鑒定。三、研究結(jié)果L、對(duì)腫瘤標(biāo)本的的HE染色和免疫組織化學(xué)染色觀察，確診為視神經(jīng)膠質(zhì)瘤I級(jí)。2、組織塊法成功體外培養(yǎng)該例視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，初長(zhǎng)出來(lái)的腫瘤細(xì)胞以梭形、圓形及橢圓形為主。細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，消化后的瘤細(xì)胞呈圓或橢圓形。體外培養(yǎng)傳至第3代時(shí)，經(jīng)免疫組化鑒定，視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞己占98％以上。腫瘤細(xì)胞傳代至第十代后，出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至停滯和凋亡等。透射電鏡可見(jiàn)瘤細(xì)胞

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文人脈絡(luò)膜黑色素瘤腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性研究姓名劉斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師李永平20080520中山大學(xué)碩士學(xué)位論文人脈絡(luò)膜黑色素瘤腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性研究分離純化成功后，進(jìn)一步研究深低溫凍融對(duì)腫瘤干細(xì)胞的殺傷作用，以及引起腫瘤細(xì)胞退變的機(jī)制，為脈絡(luò)膜黑色素瘤的臨床治療提供新思路。1研究目的通過(guò)對(duì)OCM1細(xì)胞中腫瘤干細(xì)胞的分離培養(yǎng)，驗(yàn)證脈絡(luò)膜黑色素瘤中存在著腫瘤干細(xì)胞，進(jìn)一步純化腫瘤干細(xì)胞后，研究其生物學(xué)特性。利用深低溫反復(fù)凍融對(duì)腫瘤干細(xì)胞進(jìn)行殺傷，觀察殺傷作用，并分析殺傷的可能機(jī)制。2實(shí)驗(yàn)方法使用無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)基鯽1LM舶EMEDIU札SFM，分離純化培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)的變化。使用CDL33，M1LSASLLI1免疫細(xì)胞染色，誘導(dǎo)分化，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性。深低溫反復(fù)凍融腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞后，MTT法，克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞抑制情況，髓染色，電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。使用P16，HOECHST33342免疫細(xì)胞化學(xué)染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD40及細(xì)胞膜電位的變化，并使用共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化。3結(jié)果31用SFM培養(yǎng)基培養(yǎng)后，細(xì)胞均為懸浮團(tuán)狀集落生長(zhǎng)，呈現(xiàn)典型的干細(xì)胞生長(zhǎng)方式，CDL33，MUSASLLI1陽(yáng)性表達(dá)，并可以分化為MM45，GFAP，S100，NSE陽(yáng)性的細(xì)胞。L105個(gè)CMSC細(xì)胞就可以在BALB／C裸小鼠體內(nèi)成瘤，而注射L105個(gè)OCM1細(xì)胞的BALB／C裸小鼠均未成瘤。32凍融后OCM1細(xì)胞出現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞，而CMSC則以壞死為主，凋亡細(xì)胞少見(jiàn)。電鏡下觀察到冰晶的結(jié)構(gòu)特征。33激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，凍融次數(shù)的增加，OCM1細(xì)胞凋亡率增高。O53組凋亡細(xì)胞最多，達(dá)到51％。流式細(xì)胞儀測(cè)定顯示凍融后細(xì)胞膜電位下降，凍融前后CD40陽(yáng)性細(xì)胞比率差異明顯，且呈一定的量效關(guān)系。共聚焦顯微鏡觀察到凍融后細(xì)胞發(fā)生較高比例的凋亡，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度隨著細(xì)胞凋亡比率的增高而升高，WBSTEMBLOT檢測(cè)顯示細(xì)胞凍融后SUN，IVIIL蛋白表達(dá)增加。4結(jié)論41脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞中存在腫瘤干細(xì)胞，腫瘤干細(xì)胞具有分化和增殖的能力，且表現(xiàn)出更強(qiáng)的致瘤性。Ⅲ

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多糖尿病合并難愈創(chuàng)面中表皮細(xì)胞生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文裸鼠高致瘤性人白血病細(xì)胞系的生物學(xué)特性研究姓名呂書(shū)晴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師許小平200151摘要的K562A克隆株的染色體核型，發(fā)現(xiàn)K562N細(xì)胞的致瘤性主要與1、2、16、18、20、21、11及12號(hào)等染色體的變化有關(guān)。HL60細(xì)胞系的染色體數(shù)目為3871，干系為近二倍體，從高致瘤性的HL60RL細(xì)胞系衍生的各克隆株都為近三倍體，比較分析致瘤性不同的細(xì)胞株的染色體核型，發(fā)現(xiàn)MAR3、19、21、22和5號(hào)等染色體的變化與HL60N細(xì)胞的致瘤性相關(guān)。用含有12800個(gè)基因的EDNA芯片對(duì)K562N和K562細(xì)胞系進(jìn)行基因表達(dá)差異分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)K562N和K562細(xì)胞差異表達(dá)的基因有139條，其中K562N細(xì)胞表達(dá)上調(diào)的有42條，表達(dá)下調(diào)的有97條。在這139條基因中，有85條已在GENEBANK中登錄，54條為新序列。這些在K562N細(xì)胞中表達(dá)變化的基因可以劃分為不同的功能群。上調(diào)的基因包括原癌基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)的基因、與細(xì)胞骨架、細(xì)胞動(dòng)力學(xué)相關(guān)的基因及編碼細(xì)胞代謝酶和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因。下調(diào)的基因包括潛在的腫瘤抑制基因、調(diào)控凋亡、細(xì)胞周期和信號(hào)傳導(dǎo)的基因、某些代謝相關(guān)的基因及與免疫功能相關(guān)的基因。結(jié)論與K562和HL60細(xì)胞相比，裸鼠高致瘤性的K56211、HL60N細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)行為表現(xiàn)為軟瓊脂培養(yǎng)集落形成率增高；S期細(xì)胞比例增多；常染色質(zhì)增多、異染色質(zhì)減少、微絲增多等超微結(jié)構(gòu)改變；對(duì)裸鼠NK細(xì)胞殺傷的耐受性增強(qiáng)；所致裸鼠腫瘤組織內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。細(xì)胞染色體核型分析示K562N細(xì)胞干系核型由K562細(xì)胞干系的亞三倍體轉(zhuǎn)變?yōu)榻扼w，1、2、16、18、20、21、1L、12等染色體的改變與K562N細(xì)胞系的裸鼠致瘤性升高有關(guān)。而高致瘤性的IIL60N細(xì)胞系各克隆株由HL60細(xì)胞的近二體核型轉(zhuǎn)變?yōu)榻扼w，MAR3、19、21、22、5號(hào)等染色體變化與HL60N細(xì)胞的致瘤性相關(guān)。對(duì)K562N和K562細(xì)胞的DNA芯片基因表達(dá)差異研究表明K562N細(xì)胞的致瘤性增高涉及多基因的表達(dá)變化，包括一系列腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)上調(diào)和腫瘤抑制基因的表達(dá)下調(diào)，一系列轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)變化，使細(xì)胞凋亡受阻，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展，增殖過(guò)度，另外還涉及編碼細(xì)胞骨架蛋白和代謝酶的基因表達(dá)變化。這些差異表達(dá)的基因代表了一個(gè)與K562N細(xì)胞裸鼠致瘤性相關(guān)的特異的基因表達(dá)譜。正是這些基因的表達(dá)變化，使K562N細(xì)胞表現(xiàn)出一系、／列相關(guān)的生物學(xué)特性，并導(dǎo)致其在裸鼠體內(nèi)致瘤性增強(qiáng)。_J，關(guān)鍵詞白血病致瘤性裸鼠生物學(xué)特性2

簡(jiǎn)介：遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文大黃素、羅紅霉素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)姓名范永祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)口腔內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師劉琪2003620遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文4中文摘要1人牙周膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定采用組織塊培養(yǎng)法對(duì)40例人的正常年輕恒牙的牙周膜組織進(jìn)行體辨培養(yǎng)。牙周膜戲纖維細(xì)胞培養(yǎng)成功滾為20％。細(xì)胞作生長(zhǎng)曲線觀察5代后緬藏生長(zhǎng)醞盛；分裂歪鬻，綴SABC法睪綏魏豹藏渡形絲礞白和抗角蛋白抗體染色證明其來(lái)源予中胚層的成纖維細(xì)胞。2大黃素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人牙周膜細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)髑的初步探討大黃綮E肋對(duì)牙周炎的抗炎作用機(jī)理。方法裂賃內(nèi)毒素撩多耱LPS甍激久牙髑貘纓瑰，通過(guò)繅戇培養(yǎng)按術(shù)、四哇鹽眈色滋、ELISA、RTPCR，檢測(cè)大黃素對(duì)不同狀態(tài)下靜人牙周膜細(xì)胞增馥、腫瘤壞死因子一OTTNFA分泌及腫瘸壞死因子～N轉(zhuǎn)換酶TACEMRNA表達(dá)的影響。結(jié)糶大黃素黠程穗臻濃度夔LPSO。LG／M1懿程瑤整效纛謄較鞠鼴協(xié)同作用，對(duì)高濃艘LPS10UG／ML、LOOUG／M1抑制繃胞生長(zhǎng)的作用有減緩或抵消效應(yīng)。大黃素顯著抑制LPS刺激人牙周膜細(xì)胞所引起的TNFD分泌增菇，恧對(duì)于未經(jīng)LPS列滋驗(yàn)太牙弱簇繃魏，可程進(jìn)陋一CT分泌。大黃素莘獯佟藤入牙爝膜細(xì)胞時(shí)，JC雩TACEMRNA的衰達(dá)擻無(wú)明顯作用，但對(duì)LPS刺激PDLC的TACEMRNA高表達(dá)具有明顯的抑制作用。結(jié)論大黃素能顯蔣改善LPS刺激的人牙周膜細(xì)胞的增藏活性，調(diào)控TNF噸靜釋放，對(duì)揀TACEMRNA高表達(dá)，提示使甩適當(dāng)賚8爨戇大黃綮對(duì)LPS剿激靛人牙爨貘細(xì)瑰存保護(hù)佟穗。3羅紅霉素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人牙周膜成毿維細(xì)胞腫瘤壞死閑學(xué)一A、白細(xì)胞介素6釋放，核因子KB表達(dá)的影晌

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文卵圓細(xì)胞在轉(zhuǎn)化和分化過(guò)程中的生物學(xué)特征及其分子調(diào)控機(jī)制的初步探討姓名劉君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)病理學(xué)指導(dǎo)教師薛玲20060512卵圓細(xì)胞在轉(zhuǎn)化和分化過(guò)程中的生物學(xué)特征及其分子調(diào)控機(jī)制的初步探討標(biāo)志物。。。這提示肝干細(xì)胞卵圓細(xì)胞、肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞問(wèn)存在著復(fù)雜的內(nèi)在聯(lián)系，如何調(diào)控其分化成為問(wèn)題的關(guān)鍵，也是目?jī)?nèi)外眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。然而，經(jīng)過(guò)數(shù)十年的探討，關(guān)于卵圓細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)化凋控的機(jī)制現(xiàn)今仍不十分清楚。其在何種條件下向正常方向分化何種條件下發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化其分子機(jī)制等均未闡明。針對(duì)以上研究現(xiàn)狀，我們?cè)噲D尋找啕；途徑，能夠連續(xù)、動(dòng)態(tài)地觀察卵圓細(xì)胞不同分化狀態(tài)下的生物學(xué)特征，并借助高通量、簡(jiǎn)便快捷的分子遺傳學(xué)分析技術(shù)，全面深入地探求調(diào)控卵圓細(xì)胞分化方向的關(guān)鍵因子，明確干細(xì)胞分化為成熟肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的分水嶺。這一研究不僅具有重要的理論意義一一有助于我們深入了解肝臟以及肝臟腫瘤的發(fā)生機(jī)制，也具有巨大的應(yīng)用價(jià)值一一今后將卵圓細(xì)胞安全地應(yīng)用于臨床干細(xì)胞治療。實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑噲D通過(guò)建立動(dòng)態(tài)的觀察體系，探求卵圓細(xì)胞自發(fā)轉(zhuǎn)化和濤導(dǎo)分化過(guò)程中的演變規(guī)律、生物學(xué)特征，分析相關(guān)的分子機(jī)制，以期對(duì)肝臟的發(fā)生學(xué)和肝癌的癌變機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法復(fù)蘇肝臟卵圓細(xì)胞0C3第18代P18，在分別加入細(xì)胞因子EGFA組和HGFEGFB組的培養(yǎng)條件下長(zhǎng)期體外培養(yǎng)，運(yùn)用常規(guī)細(xì)胞生物性狀檢測(cè)指標(biāo)以及免疫細(xì)胞化學(xué)、半定量RTPCR等技術(shù)，觀察0C3在不同條件下的分化狀態(tài)，并運(yùn)用蛋白芯片技術(shù)分析該過(guò)程中蛋白表達(dá)譜的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論為了鑒定所復(fù)蘇的細(xì)胞的性質(zhì)，實(shí)驗(yàn)前期對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)等指標(biāo)的檢測(cè)。其結(jié)果表明，這種細(xì)胞為卵圓形核，體積小約為10UM，胞漿少。電子顯微鏡顯示為原始未分化細(xì)胞之超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；OV一6、CKIT等干細(xì)胞標(biāo)志陽(yáng)性，表明這種細(xì)胞是建株之卵圓細(xì)胞。1、細(xì)胞在表皮生長(zhǎng)因子EGF的作用F維持生長(zhǎng)培養(yǎng)至66代，在一般形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)及生物學(xué)性狀等方面，均發(fā)生了明顯變化，已經(jīng)符合轉(zhuǎn)化細(xì)胞條件。這表明，化學(xué)致癌劑誘發(fā)增生的卵圓細(xì)胞，在體外培養(yǎng)能維持生II

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文SNC19/ST14基因的表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性及其轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的影響姓名孫立峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師鄭樹(shù)20040501浙缸掌博士掌位論文SNCL9，STL4基因的表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性及其轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的影響中文摘要近年來(lái)腫瘤的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤致死的重要原因?。隨著腫瘤分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制成為最熱門(mén)的研究領(lǐng)域之一，但迄今對(duì)轉(zhuǎn)移機(jī)制仍缺乏明確詳盡的解釋。目前已認(rèn)識(shí)到，腫瘤的轉(zhuǎn)移是一系列持續(xù)選擇的過(guò)程，包括腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)EEL的識(shí)別、對(duì)ECM的降解、細(xì)胞遷移、在脈管內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)播散以及轉(zhuǎn)移器官的選擇。其中惡性細(xì)胞與ECM的相互作用被認(rèn)為足惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中攝關(guān)鍵的分子事件之一?。腫瘤細(xì)胞必須識(shí)別和降解其周?chē)腅CM才能發(fā)生侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。因此研究ECM降解酶對(duì)認(rèn)識(shí)和控制腫瘤轉(zhuǎn)移具有重要的意義。與腫瘤細(xì)胞的侵潤(rùn)有關(guān)的一種ECM降解酶家族被稱(chēng)為絲氨酸蛋白酶家族包括尿激酶型UPA，彈性蛋白酶ELASTASE，組織蛋白酶GCATHEPSING等“1。晟近又發(fā)現(xiàn)一個(gè)絲氨酸蛋白酶家族的新成員一II型跨膜絲氨酸蛋白酶家族TYPEIITRANSMENBRANCESERINEPROTEASES，TRSPS，其家族成員廣泛分布于各種組織細(xì)胞的膜上，參與降解ECM、水解活化細(xì)胞膜蛋白、與細(xì)胞骨架相互作用及信號(hào)傳導(dǎo)等作用，而且可能還與腫瘤細(xì)胞的侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)”1。SNCL9俗，，4／TGTSPL／MATRIPTASE基因被認(rèn)為是TTSPS基因家族的一個(gè)成員”’。SNCL9基因是1993年浙江大學(xué)腫瘤研究所鄭樹(shù)教授等應(yīng)用減式雜交技術(shù)從正常大腸CDNA文庫(kù)中篩選到的一個(gè)太腸癌新相關(guān)基因“‘?，1995年被GENBANK作為新基因登錄，1998年國(guó)際基因命名委員會(huì)將SNCL9命名為STL4”1。隨后，從不同物種的組織細(xì)胞、乳汁和腫瘤細(xì)胞系中，得到多個(gè)SNCIG／STL4基因的同源產(chǎn)物，如MATRIPTASE”’，膜型絲氨酸蛋白酶MEMBRANCE～TYPESERINEPROTEINASE一1，},FISPL■EPITHINL。?，XMTSPI?1，MATRIPTASE2?和MMATRIPTASE一2?1。SNCL9／STL4蛋白現(xiàn)被命名為STL4／MTSPL／MATRIPTASE／TADG一15EC3．4．21。蛋白酶活化受2PROTEINASEACTIVATEDRECEPTOR2．PAR2、

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多不同來(lái)源CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性與臨床應(yīng)用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文聚焦超聲近場(chǎng)對(duì)體外內(nèi)皮細(xì)胞ECV304生物學(xué)效應(yīng)姓名劉毅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師李成志20090501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文方法1聚焦超聲近場(chǎng)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞ECV304增殖的影響實(shí)驗(yàn)分組輻照功率43、5W；輻照頻率101、L12MHZ；輻照時(shí)間5、10、L5、20、25、30S。實(shí)驗(yàn)方法MTT法檢測(cè)不同參數(shù)條件下的聚焦超聲近場(chǎng)對(duì)體外培養(yǎng)ECV304增殖的影響。2最佳聚焦聚焦超聲近場(chǎng)輻照參數(shù)的篩選用SAS統(tǒng)計(jì)軟件分析內(nèi)皮細(xì)胞相對(duì)成活比OD處理組／0D正常組，篩選出細(xì)胞最大成活比時(shí)的聚焦超聲近場(chǎng)輻照參數(shù)。3聚焦超聲近場(chǎng)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn)分組正常對(duì)照組、聚焦超聲近場(chǎng)輻照組輻照參數(shù)設(shè)置112MHZ、43W、LOS。實(shí)驗(yàn)方法采用一維SDSPAGE電泳色譜電噴霧離子阱質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)聚焦超聲近場(chǎng)輻照內(nèi)皮細(xì)胞前后的差異蛋白質(zhì)；免疫印跡驗(yàn)證差異蛋白ACTIN的表達(dá)。繼里拿口術(shù)1聚焦超聲近場(chǎng)輻照后ECV304的增殖依賴(lài)于輻照的功率、頻率、時(shí)間；與其他對(duì)照組相比，在輻照功率43W、頻率112MHZ、輻照時(shí)間10S的條件下，最有利于細(xì)胞增殖。同時(shí)，經(jīng)聚焦超聲近場(chǎng)輻照后的ECV304生長(zhǎng)形態(tài)改變，近圓形。2結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞增殖具體情況，我們將采用輻照功率43W、頻率112MHZ、時(shí)間L0S的聚焦超聲近場(chǎng)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。弓

簡(jiǎn)介：；711醫(yī)科大學(xué)181098學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，實(shí)驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專(zhuān)利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。一繇搬勒締勃岬凰齠年’臼々日；；IT醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)老師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名讒朋免灸導(dǎo)師麟易嗽馳年伽鈾7J錄14網(wǎng)膜色素上皮∞E細(xì)胞的影響8養(yǎng)的研究●；I材料與方法9結(jié)果12附圖13討論16小結(jié)18參考文獻(xiàn)19第二部分BEVACIZUMABAVASTIN對(duì)豬視網(wǎng)膜色素上皮RPE細(xì)胞的毒性作用研究前言21刖舌2L材料與方法21結(jié)果J23附圖24附表28討論29小結(jié)30參考文獻(xiàn)31第三部分探討B(tài)EVAEIZUMABAVASTIN對(duì)豬視網(wǎng)膜色素上皮RPE細(xì)胞的功能研究前言32剛吾3Z材料與方法32結(jié)果31／多日7KJ附圖38附表42

簡(jiǎn)介：遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文涎腺腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性初探姓名陳芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師宋琦20070501遵義醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文涎腺腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性初探涎腺腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性初探中文摘要惡性腫瘤是目前危害人類(lèi)健康的重要疾病之一，其發(fā)病及轉(zhuǎn)移機(jī)制是醫(yī)學(xué)家們正努力研究的課題方向，也直接關(guān)系到腫瘤的防治策略。近年來(lái)腫瘤千細(xì)胞學(xué)說(shuō)的提出為我們重新認(rèn)識(shí)腫瘤的本質(zhì)與起源，以及臨床腫瘤治療的研究提供了新的思考方向。舊的L對(duì)腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ADENOIDCYSTICCARCINOMACELLCLONESHIG蜘YMETASTATICTOTHELUNGACCM中不同表型的腫瘤亞群細(xì)胞的細(xì)胞膜抗原表達(dá)的差異性進(jìn)行研究和分析，為今后進(jìn)一步分離腫瘤干細(xì)胞打下一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！痉椒↙①采用單細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法了解ACCM的分裂和增殖的特點(diǎn)，以探討腫瘤于細(xì)胞存在的可能性。②利用MRR比色試驗(yàn)法繪制ACCM的生長(zhǎng)曲線。③利用流式細(xì)胞儀FLOWCYTOMETRYFCM檢測(cè)ACCM腫瘤細(xì)胞的表面抗原CD24、CD44、ABCG2的表達(dá)情況。④采用免疫組化的方法檢測(cè)單細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACCM腫瘤細(xì)胞與常規(guī)體外傳代培養(yǎng)的ACCM腫瘤細(xì)胞的CD44、CD24和MMP9表達(dá)差異度?！窘Y(jié)果L①在單細(xì)胞體外培養(yǎng)6D后，ACCM單細(xì)胞僅有862％持續(xù)分裂、增殖，麗并非全部的細(xì)胞都發(fā)生分裂，②ACCM的生長(zhǎng)曲線顯示細(xì)胞的倍增時(shí)間接近48小時(shí)。③免疫組化結(jié)果顯示，單細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACCM細(xì)胞與常規(guī)傳代培養(yǎng)的ACCM細(xì)胞相比，兩者在CD24、CD44和MMP9的表達(dá)上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，CD44和MMP9在ACCM細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)率很高，CD24在ACCM細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)率較低。④FCM檢測(cè)結(jié)果顯示，ACCM細(xì)胞表面CD44、ABCG2和CD44CD24。的表達(dá)率分別為90，67％、864％和7909％?！窘Y(jié)論LDACCM腫瘤細(xì)胞具有異質(zhì)性，并不是所有的ACCM細(xì)胞都能克隆增殖，只有一小部分細(xì)胞能不斷地分裂增殖，大多數(shù)細(xì)胞最終死亡或凋亡。②單細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACCM細(xì)胞與常規(guī)傳代培養(yǎng)的ACCM細(xì)胞相比，CD44、CD24和MMP一9的表達(dá)無(wú)顯著的增加或降低，因而對(duì)于分離ACCM的腫瘤干細(xì)胞，CD44、CD24和MMP9缺乏特異性。CD44和MMP9與腫瘤的高轉(zhuǎn)移性密切相關(guān)。轉(zhuǎn)移潛能高的涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的基質(zhì)金屬蛋白酶分泌。ACCM也象某些實(shí)體瘤一樣含有側(cè)群細(xì)胞SIDEPOPULATIONSP在后續(xù)的研究中，可考慮利用SP細(xì)胞的表型標(biāo)記“ABCG2”，用FCM或磁珠分選技術(shù)將SP細(xì)胞從腫瘤中分離出來(lái)，通過(guò)對(duì)SP細(xì)胞的研究迸一步探討腫瘤