簡介：江大食品微生物972011歷屆試題9797年一．名詞解釋一．名詞解釋1原生質(zhì)體；2芽孢；3菌落；4誘導(dǎo)酶；5生長因素6回復(fù)突變；7誘導(dǎo)；8拮抗；9血清學(xué)反應(yīng)；10巴斯德效應(yīng)二．圖解二．圖解1曲酶的細(xì)胞形態(tài)；2Z值；3微生物營養(yǎng)物質(zhì)的四種運輸方式；4微生物生長與T的關(guān)系三．填空三．填空1微生物生長的特點是___、、、、、生長旺、繁殖快。15在空氣中能較長時間的微生物類群是____、_____、特點是____16培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿倒置是為了_____和_____17平板菌落計數(shù)法結(jié)果表達(dá)中常用的“CFU”的意思是_____四．問答四．問答1如何使微生物合成比自身需求量更多的產(chǎn)物舉例說明；2如要長期保藏低酸性食品和酸性食品，通常分別采用什么溫度殺菌WHY3設(shè)計一種從自然界中篩選高溫淀粉酶產(chǎn)生菌的試驗方案，并解釋主要步驟的基本原理；4下列食品如變質(zhì)，主要是有什么類型的微生物所引起說明其原因1〉市售面包2〉充CO2的果汁；5菌種保藏主要利用什么手段原理舉例說明9898年

簡介：世紀(jì)金榜圓您夢想WWWJB1000COM第1頁（共17頁）山東世紀(jì)金榜科教文化股份有限公司四四四基因工程基因工程簡介一基因工程的基本內(nèi)容基因工程的基本內(nèi)容教學(xué)目的教學(xué)目的1、基因工程的概念（A知道）。2、基因操作的工具和基本步驟（A知道）。重點和重點和難點1、教學(xué)重點基因操作的工具和基本步驟。2、教學(xué)難點、1、限制性內(nèi)切酶和運載體的作用。、2、提取目的基因的方法和目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的途徑。教學(xué)教學(xué)過程【板書】基因工程的概念基因的剪刀限制性內(nèi)切酶基因操作的工具基因的針線DNA連接酶基因工程基因的運輸工具運載體的基本內(nèi)容提取目的基因基因操作的目的基因與運載體結(jié)合基本步驟將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的表達(dá)與檢測【注解】一、概念基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù),是在生物體外對，通過對DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對生物有基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。二、操作工具（一）基因的剪刀限制性內(nèi)切酶主要存在于微生物體內(nèi)，一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切點上切割DNA分子。切開的帶有幾個伸出核苷酸的DNA單鏈切口，被稱為黏性末端。世紀(jì)金榜圓您夢想WWWJB1000COM第3頁（共17頁）山東世紀(jì)金榜科教文化股份有限公司C．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達(dá)的菌類細(xì)胞株系D．從自然界中選取能迅速增殖的菌類基因操作的工具和基本步驟（A知道）．下列關(guān)于基因工程的敘述正確的是（D）A．DNA連接酶能使兩個粘性末瑞之間的堿基結(jié)合B．限制性內(nèi)切酶的切口一定是GAATTC的堿基序列C．質(zhì)粒是基因工程中唯一用作運載目的基因的工具D．對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制的過程可稱為分子“克隆”．有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（B）A．限制性內(nèi)切酶只在獲得目的基因時才用B．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可以為合成目的基因提供資料C．質(zhì)粒都可以作為運載體D．重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成．基因工的操作步驟①使目的基因與運載體相結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③檢測目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求④提取目的基因，正確的操作順序是（C）A．③②④①B．②④①③C．④①②③D．③④①②．下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述，正確的是（C）A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運載體B．所有的限制酶都只能識別同一種特定的核苷酸序列C．選用細(xì)菌為重組質(zhì)粒受體細(xì)胞是因為質(zhì)粒易進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞且繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實現(xiàn)表達(dá)．有關(guān)基因工程的敘述正確的是（D）A．限制性內(nèi)切酶只在獲得目的基因是才用B．重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成C．質(zhì)粒都可作運載體D．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料．實施基因工程第一步的一種方法是把所需的基因從供體細(xì)胞內(nèi)分離出來，這要利用限制性內(nèi)切酶。一種限制性內(nèi)切酶能識別DNA分子中的GAATTC順序，且點在G和A之間，這是應(yīng)用了酶的（B）A．高效性B．專一性C．多樣性D．催化活性受外界條件影響．基因工程技術(shù)中的目的基因主要來源于（A）A．自然界現(xiàn)存生物體內(nèi)的基因B．自然突變產(chǎn)生的新基因C．人工誘變產(chǎn)生的新基因D．科學(xué)家在實驗室人工合成的基因

簡介：建設(shè)項目環(huán)境影響報告表（污染影響類）項目名稱萬科源生物生產(chǎn)車間建設(shè)工程項目建設(shè)單位（蓋章）天津萬科源生物科技有限公司編制日期2021年6月中華人民共和國生態(tài)環(huán)境部制1一、建設(shè)項目基本情況建設(shè)項目名稱萬科源生物生產(chǎn)車間建設(shè)工程項目項目代碼20121203188905746205建設(shè)單位聯(lián)系人楊震聯(lián)系方式15302194999建設(shè)地點天津濱海高新區(qū)海洋科技園新北路4668號創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)園29A號廠房二層?xùn)|側(cè)2地理坐標(biāo)（117°40′1426″，39°3′57311″）國民經(jīng)濟(jì)行業(yè)類別C2770衛(wèi)生材料及醫(yī)藥用品制造建設(shè)項目行業(yè)類別二十四、醫(yī)藥制造業(yè)49衛(wèi)生材料及醫(yī)藥用品制造建設(shè)性質(zhì)?新建（遷建）□改建□擴(kuò)建□技術(shù)改造建設(shè)項目申報情形?首次申報項目□不予批準(zhǔn)后再次申報項目□超五年重新審核項目□重大變動重新報批項目項目審批（核準(zhǔn)/備案）部門（選填）津濱海高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)行政審批局項目審批（核準(zhǔn)/備案）文號（選填）津高新審?fù)秱浒?020333號總投資（萬元）753環(huán)保投資（萬元）5環(huán)保投資占比（）066施工工期8月～9月是否開工建設(shè)?否□是用地（用海）面積（M2）1600專項評價設(shè)置情況未設(shè)置專項規(guī)劃情況天津濱海高新區(qū)海洋科技園控制性詳細(xì)規(guī)劃修編（20192025）規(guī)劃環(huán)境影響評價情況文件名稱天津濱海高新區(qū)海洋科技園控制性詳細(xì)規(guī)劃修編環(huán)境影響報告書審查機(jī)關(guān)天津市濱海新區(qū)生態(tài)環(huán)境局審批文號津濱環(huán)函〔2020〕4號規(guī)劃及規(guī)劃環(huán)境影響評價符合性分析本項目位于天津濱海高新區(qū)海洋科技園新北路4668號創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)園29A號廠房二層?xùn)|側(cè)2，根據(jù)天津濱海高新區(qū)海洋科技園控制性詳細(xì)規(guī)劃修編環(huán)境影響報告書（津濱環(huán)函〔2020〕4號）中相關(guān)內(nèi)容可知天津濱海高新區(qū)海洋科技園，規(guī)劃面積為447KM2。規(guī)劃四至東至京山線鐵路，西至唐津高速公路，北至港城大道、北環(huán)鐵路、京津高速，南至京津塘高速公路。園區(qū)用水、用電、供熱、污水處理、垃圾處理等市政基礎(chǔ)設(shè)施全部依托外界，實現(xiàn)了與周邊區(qū)域資源共享。園區(qū)市政基礎(chǔ)設(shè)施符合城市總體規(guī)劃要求，規(guī)劃規(guī)?；竞侠?。園區(qū)為無燃煤區(qū)，能源結(jié)構(gòu)為天然氣、電力等清潔能源。

簡介：凝聚凝聚指在投加的化學(xué)物質(zhì)（鋁、鐵的鹽類或石灰等）作用下，膠體脫穩(wěn)并使粒子相互聚集成１MM大小塊狀凝聚體的過程。PPT電泳電泳荷電的膠體粒子在電場中的移動。PPT或者荷電溶質(zhì)（電解質(zhì)）或粒子在電場作用下發(fā)生定向泳動的現(xiàn)象P362電泳遷移率（電泳遷移率（MOBILITY）在電位梯度E的影響下，帶電顆粒在時間T中的遷移距離D。PPT或者單位電場強度下的電泳速度。P363膜分離的概念膜分離的概念利用膜的選擇性（孔徑大小），以膜的兩側(cè)存在的能量差作為推動力，由于溶液中各組分透過膜的遷移率不同而實現(xiàn)分離的一種技術(shù)。PPT或者利用具有一定選擇性透過特性的過濾介質(zhì)進(jìn)行物質(zhì)的分離純化。P56離子交換離子交換在吸附劑與溶液間發(fā)生離子交換，即吸附劑吸附離子后，它同時要放出等當(dāng)量的離子于溶液中。PPT親和層析親和層析是利用生物分子對之間所具有的專一而又可逆的親和力使生物分子分離純化的技術(shù)。PPT過濾過濾是在外力作用下，利用過濾介質(zhì)使懸浮液中的液體通過，而固體顆粒被截留在介質(zhì)上，從而實現(xiàn)固液分離的一種單元操作。PPT或者利用薄片形多孔性介質(zhì)（如濾布）截留固液懸浮液中的固體粒子，進(jìn)行固液分離的方法。P20沉降沉降離心分離是基于固體顆粒和周圍液體密度存在差異，在離心場中使不同密度的固體顆粒加速沉降的分離過程，當(dāng)靜置懸浮液時，密度較大的固體顆粒在重力作用下逐漸下沉，這一過程稱為沉降。PPT重結(jié)晶重結(jié)晶是利用雜質(zhì)和結(jié)晶物質(zhì)在不同溶劑和不同溫度下的溶解度不同，將晶體用合適的溶劑再次結(jié)晶，以獲得高純度的晶體的操作。PPT分辨率分辨率也稱分離度。它是指相鄰兩色譜保留值之差與兩峰底寬平均值之比。PPT晶體晶體形成新相（固體）需要一定的表面自由能。因此，溶液濃度達(dá)到飽和溶解度時，晶體尚不能析出，只有當(dāng)溶質(zhì)濃度超過飽和溶解度后，才可能有晶體析出。溶液達(dá)到過飽和狀態(tài)是結(jié)晶的前提；過飽和度是結(jié)晶的推動力。PPT分子伴侶分子伴侶是一種熱休克蛋白質(zhì)，在體內(nèi)和體外都具有抑制蛋白質(zhì)伸展肽鏈錯誤折疊和聚集、促進(jìn)肽鏈折疊成天然活性肽的作用。P394對流干燥對流干燥對流干燥過程中載熱體對對流方式與濕物料顆粒（或液滴）直接接物理萃取物理萃取溶質(zhì)根據(jù)相似相溶的原理在兩相間達(dá)到分配平衡，萃取劑與溶質(zhì)之間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。例如，用乙酸丁酯萃取青霉素。物理萃取廣泛應(yīng)用于石油化工、抗生素及天然植物中有效成分的提取過程P92/PPT化學(xué)萃取化學(xué)萃取用脂溶性萃取劑與溶質(zhì)之間的化學(xué)反應(yīng)生成脂溶性復(fù)合分子實現(xiàn)溶質(zhì)向有機(jī)相的分配。萃取劑與溶質(zhì)之間的化學(xué)反應(yīng)，包括離子交換和絡(luò)合反應(yīng)等。如用萃取劑季銨鹽氯化三辛基甲銨，RCL萃取氨基酸A。P92/PPT鹽溶鹽溶向蛋白質(zhì)的水溶液逐漸加入電解質(zhì)是，開始階段蛋白質(zhì)的活度系數(shù)降低，并且蛋白質(zhì)吸附鹽離子后，帶電表層使蛋白質(zhì)分子間相互排斥，而蛋白質(zhì)分子與水分子間的相互作用卻加強，因而蛋白質(zhì)的溶解度增大，這種現(xiàn)象稱為鹽溶。P37沉析沉析利用沉析劑使所需提取的生化物質(zhì)或雜質(zhì)在溶液中的溶解度降低而形成無定形固體沉淀的過程。了解特定操作簡單、經(jīng)濟(jì)、濃縮倍數(shù)高；種類鹽析、有機(jī)溶劑沉析、等電點沉析等；缺點針對復(fù)雜體系而言，分離度不高、選擇性不強）一般沉析操作過程1、在經(jīng)過濾或離心后的樣品中加入沉析劑；2、沉淀物的陳化，促進(jìn)晶體生長；3、離心或過濾，收集沉淀物。網(wǎng)上找的吸附等溫線吸附等溫線當(dāng)吸附劑與溶液中的溶質(zhì)達(dá)到平衡時，其吸附量Q同溶液中溶質(zhì)的平衡應(yīng)與溫度有關(guān)。當(dāng)溫度一定時，吸附量只和濃度有關(guān)，QFC。PPT保留體積保留體積VR指從進(jìn)樣開始到被測組份在柱后出現(xiàn)濃度極大點時所通過的流動相體積。色譜PPT死體積死體積VM指色譜柱內(nèi)固定相顆粒間所剩留的空間、色譜儀中管路和連接頭間的空間以及檢測器的空間的總和，當(dāng)后兩項很小而可忽略不計時，VM可由TM與流動相體積流速F0ML/MIN的乘積計算。色譜PPT理論塔板高度理論塔板高度單位理論塔板的長度稱為理論塔板高度。它等于色譜柱長度除以理論塔板數(shù)。用理論塔板數(shù)與板高表示柱效率時是等價的。網(wǎng)上找的。估計是計算題。色譜PPT過飽和溶液過飽和溶液溶質(zhì)濃度超過飽和溶解度時，該溶液稱之為過飽和溶液；溶質(zhì)只有在過飽和溶液中才能析出。結(jié)晶PPT介電常數(shù)介電常數(shù)是一個化合物摩爾極化程度的量度，物質(zhì)的介電常數(shù)Ε可表示為ΕC/C0（C為物質(zhì)在電容器中的靜電容量值F；C0為無介質(zhì)時，同一電容器中的靜電容量值F）。根據(jù)溶質(zhì)的介電常數(shù)選擇極性相近的溶劑作為萃取劑，這是溶劑選擇的重要方法之一。網(wǎng)上找的，在有機(jī)溶劑萃取里

簡介：生物系統(tǒng)模擬生物系統(tǒng)模擬第一章系統(tǒng)與模擬概論第一章系統(tǒng)與模擬概論系統(tǒng)的定義系統(tǒng)的定義系統(tǒng)是由相互聯(lián)系、相互制約、相互依存的若干組成部分要素結(jié)合在一起形成的具有特定功能和運動規(guī)律的有機(jī)整體。是為達(dá)到某一共同目標(biāo)而協(xié)同動作的各子系統(tǒng)的集合。系統(tǒng)的三個要素系統(tǒng)的三個要素實體組成系統(tǒng)的個體個體屬性組成系統(tǒng)的每一實體所具有的全部有效特征有效特征活動實體隨時間推移而發(fā)生的屬性屬性變化證實證實VERIFICATION是對用計算機(jī)代碼表示數(shù)學(xué)模型和程序員的意圖的精度評估。校驗校驗CALIBRATION調(diào)整模型參數(shù)，使模擬結(jié)果與從真實世界中的測量結(jié)果盡可能地吻合。驗證驗證VALIDATION模擬結(jié)果與前面參數(shù)估計或校驗時沒有用過的真實系統(tǒng)數(shù)據(jù)相比較的過程。生物系統(tǒng)模型中生物系統(tǒng)模型中參數(shù)和常數(shù)是模型組件的屬性特征模型組件的屬性特征，它在模擬過程中不會發(fā)生變化。參數(shù)參數(shù)值不是那么確定的，但是參數(shù)值在模擬過程中卻是保持不變的。常數(shù)常數(shù)是一些可信的精確的數(shù)量值。這些數(shù)量值在實驗條件發(fā)生變化，或模型被用于不同尺度時，不會發(fā)生變化。工程型系統(tǒng)工程型系統(tǒng)人們?yōu)榱藵M足某種需要或者實驗?zāi)硞€預(yù)定的功能，通過某種手段而構(gòu)造的系統(tǒng)非工程系統(tǒng)非工程系統(tǒng)自然和社會在發(fā)展過程中形成的，被人們在長期的生產(chǎn)勞動和社會實踐中逐漸認(rèn)識漸認(rèn)識的系統(tǒng)。BLOB算法的核心思想算法的核心思想就是在一塊區(qū)域內(nèi)，把出現(xiàn)“灰度突變”的范圍找出來。算法實現(xiàn)，一般是基于“邊緣尋找”算法之上。生物系統(tǒng)是一種層次化的組織層次化的組織N繪制邏輯圖，流程圖N寫計算機(jī)代碼N在計算機(jī)上執(zhí)行代碼，產(chǎn)生輸出狀態(tài)變量狀態(tài)變量描述系統(tǒng)組件情形的量。系統(tǒng)組件情形的量。這些狀態(tài)變量會隨著組件之間的交互之間的交互及組件和系統(tǒng)環(huán)境的交互環(huán)境的交互而發(fā)生改變。例如土壤含水量和作物的生物產(chǎn)量科學(xué)性模型科學(xué)性模型研究的主要目的是增加知識，增加洞察力關(guān)于作物生理過程假設(shè)的模型（如不同溫度和CO2濃度下的光合作用的定量模型）可能不能很好地預(yù)測系統(tǒng)的行為，但是研究本身可能是非常有價值能夠推斷出哪些方向知識不夠充分，哪些方面需要進(jìn)一步研究模型的類型比較重要，它應(yīng)當(dāng)是結(jié)構(gòu)化的，能夠表現(xiàn)出目前科學(xué)對過程的理解，能夠有助于設(shè)計實驗，數(shù)據(jù)采集工程性模型工程性模型主要目的是對一個系統(tǒng)更好的控制與管理模型達(dá)到可接受的精度就可以了；只要模型是可靠的和準(zhǔn)確的，模型的類型不太重要一個軟件產(chǎn)品、一個應(yīng)用設(shè)計的軟硬件一體化產(chǎn)品L系統(tǒng)模型系統(tǒng)模型1968年，生物學(xué)家ARISTIDLINDENMAYER從生物形態(tài)學(xué)的角度出發(fā)，提出了一種用以構(gòu)造提出了一種用以構(gòu)造生物組織生長形態(tài)的并行語生物組織生長形態(tài)的并行語法，簡稱為L系統(tǒng)，此方法的創(chuàng)造性在于形式化地描述了形式化地描述了植物或其他生物的結(jié)構(gòu)特征和生長過程。R．SMITH和PRUSINKIEWICZ等人將L系統(tǒng)與計算機(jī)圖形學(xué)結(jié)合起來，在計算機(jī)上產(chǎn)生了大量栩栩如生的植物形態(tài)第二章第二章常用系統(tǒng)建模方法常用系統(tǒng)建模方法

簡介：A知道知道B理解理解C看看看看傳統(tǒng)發(fā)酵傳統(tǒng)發(fā)酵最初發(fā)酵是用來描述酵母菌作用于果汁或麥芽汁產(chǎn)生氣泡的現(xiàn)象，或是指酒的生產(chǎn)過程。生化和生理學(xué)意義的發(fā)酵生化和生理學(xué)意義的發(fā)酵指微生物在無氧條件下，分解各種有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生能量的一種方式。在無氧等外源氫受體的條件下，底物脫氫后所產(chǎn)生的還原力H未經(jīng)呼吸鏈傳遞而直接交某一內(nèi)源性中間代謝物接受，以實現(xiàn)底物水平磷酸化產(chǎn)能的一類生物氧化反應(yīng)。如葡萄糖在無氧條件下被微生物利用產(chǎn)生酒精并放出CO2。工業(yè)上發(fā)酵工業(yè)上發(fā)酵發(fā)酵發(fā)酵利用微生物在有或無氧條件下的生命活動來生產(chǎn)微生物菌體或代謝產(chǎn)物的過程。微生物工程涵義微生物工程涵義微生物工程微生物工程是滲透有工程工程學(xué)的微生物學(xué)微生物學(xué)。利用微生物的特定性狀、功能，通過現(xiàn)代化工程技術(shù)，生產(chǎn)各種生理活性物質(zhì)的技術(shù)體系是在酵母發(fā)酵生產(chǎn)飲料酒的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，又稱為發(fā)酵工程發(fā)酵工程是將傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與基因工程、細(xì)胞工程、代謝工程和計算機(jī)自動控制傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與基因工程、細(xì)胞工程、代謝工程和計算機(jī)自動控制等新技術(shù)結(jié)合并發(fā)展起來的現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)微生物工程的發(fā)展階段微生物工程的發(fā)展階段1天然發(fā)酵階段2純培養(yǎng)技術(shù)的建立巴斯德，科赫等。人為地控制微生物的發(fā)酵進(jìn)程。3通氣攪拌發(fā)酵技術(shù)的建立4代謝控制發(fā)酵技術(shù)5開拓發(fā)酵原料時期6基因工程階段定向地改變生物性狀發(fā)酵的流程發(fā)酵的流程見筆記見筆記第二章第二章國外菌種保藏中心國外菌種保藏中心美國典型微生物菌種保藏中心ATCC英國國家典型菌種保藏所NCTC日本大阪發(fā)酵研究所（IFO）法國巴斯德研究所（IPL）國內(nèi)菌種保藏中心國內(nèi)菌種保藏中心1普通微生物菌種保藏管理中心CCGMC中科院微生物所，北京真菌、細(xì)菌中科院武漢病毒所，武漢病毒2農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心ACCC農(nóng)科院土壤肥料所，北京3工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC中國食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所，北京菌種篩選主要步驟和掌握一種菌的分離方法菌種篩選主要步驟和掌握一種菌的分離方法見筆記見筆記誘變育種誘變育種利用誘變劑處理微生物細(xì)胞，提高基因突變頻率，再通過合適的篩選辦法獲得所需的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種的方法物理誘變劑物理誘變劑射線如紫外線、X射線、Γ射線，快中子等化學(xué)誘變劑化學(xué)誘變劑化學(xué)因子如堿基類似物、5氟尿嘧啶、烷化劑等?；瘜W(xué)誘變劑中使用最多、最有效的是烷化劑烷化劑C誘變劑的選擇誘變劑的選擇1．堿基類似物和羥胺具有很高的特異性，但很少使用，回復(fù)突變率高，效果不大。2．亞硝酸和烷化劑應(yīng)用較廣，造成的遺傳損傷較多。其中亞硝基胍和甲基磺酸乙酯亞硝基胍和甲基磺酸乙酯常被稱為“超誘變劑”，甲基磺酸乙酯是毒性最小的誘變劑之一。3．吖啶類誘變劑可以造成生化代謝途徑的完全中斷。4．紫外線仍十分有效。電離輻射是造成染色體巨大損傷的最好誘變劑，它能造成不可回復(fù)的缺突變。但它可能影響鄰近基因的功能。誘變育種步驟誘變育種步驟1出發(fā)菌株的選擇2處理菌懸液的制備3誘變處理4中間培養(yǎng)5分離和篩選出發(fā)菌株的選擇出發(fā)菌株的選擇4．出發(fā)菌株開始時可以同時選2～3株，在處理比較后，將更適合的出發(fā)菌株留作繼續(xù)誘變。中間培養(yǎng)中間培養(yǎng)由于在發(fā)生了突變尚未表現(xiàn)出來之前，有一個表現(xiàn)延遲的過程，即細(xì)胞內(nèi)原有酶量的斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基對于放線菌或霉菌產(chǎn)孢子培養(yǎng)基，氮源碳源不宜太豐富，否則易長菌絲而較少形成孢子。種子培養(yǎng)基特點種子培養(yǎng)基特點1必須有較完全和豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，特別需要充足的氮源和生長因子2種子培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不必太高。供孢子發(fā)芽生長用的種子培養(yǎng)基，可添加一些易被吸收利用的碳源和氮源。3種子培養(yǎng)基成分還應(yīng)考慮與發(fā)酵培養(yǎng)基的主要成分相近。前體物質(zhì)前體物質(zhì)是指某些化合物添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中，能直接被微生物在生物合成過程中結(jié)合到產(chǎn)物中去，而其自身的結(jié)構(gòu)沒有多大的變化，但產(chǎn)物量提高。在發(fā)酵中添加前體物質(zhì)將有利于產(chǎn)物的合成和顯著提高產(chǎn)量，如苯乙酸及其衍生物被認(rèn)為是青霉素的前體物質(zhì)用法用法前體使用時普遍采用流加的方。前體一般都有毒性，濃度過大對菌體的生長不利。前體一般都有毒性，濃度過大對菌體的生長不利。苯乙酸，一般基礎(chǔ)料中僅僅添加007。前體相對價格較高，添加過多，容易引起揮發(fā)和氧化，前體相對價格較高，添加過多，容易引起揮發(fā)和氧化，流加也有利于提高前體的轉(zhuǎn)化率。流加也有利于提高前體的轉(zhuǎn)化率。金屬離子的影響金屬離子的影響有些種類的發(fā)酵生產(chǎn)對金屬離子相當(dāng)敏感，因為有些金屬離子是中間代謝酶抑制劑或激活劑。對于有重大影響的金屬離子必須嚴(yán)格控制。如檸檬酸發(fā)酵中鐵、錳和鋅離子都能明顯影響產(chǎn)量，鈣離子對細(xì)菌淀粉酶的生產(chǎn)有促進(jìn)作用，而鈷離子對葡萄糖異構(gòu)酶的發(fā)酵是必需的，這些在培養(yǎng)基配制時都必須予以注意。碳源碳源葡萄糖葡萄糖是最易利用的糖，并且作為加速微生物生長的一種有效的糖。過多的葡萄糖會過分加速菌體的呼吸，以致培養(yǎng)基中的溶解氧不能滿足需要。油和脂肪油和脂肪在微生物分泌的脂肪酶作用下水解為甘油和脂肪酸，在溶解氧的參與下，氧化成水和CO2。因此用脂肪作碳源時需比糖代謝供給更多的氧。淀粉淀粉一般要經(jīng)菌體產(chǎn)生的胞外酶水解成單糖后再被吸收利用?？煽朔咸汛x過快的弊病。來源豐富，價格比較低廉。常用的為玉米淀粉、小麥淀粉和甘薯淀粉。無機(jī)氮源銨鹽、硝酸鹽、氨水等。微生物對其吸收利用比有機(jī)物快，所以也稱速效氮。無機(jī)氮源銨鹽、硝酸鹽、氨水等。微生物對其吸收利用比有機(jī)物快，所以也稱速效氮。利用無機(jī)氮時應(yīng)注意引起的PH變化。實驗室中常用蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等作為有機(jī)氮源，工業(yè)生產(chǎn)上常用硫酸銨、尿素、氨水、豆餅粉、花生餅粉、麩皮等常用硫酸銨、尿素、氨水、豆餅粉、花生餅粉、麩皮等原料作氮源。根據(jù)經(jīng)濟(jì)效益選擇培基原料根據(jù)經(jīng)濟(jì)效益選擇培基原料碳源的代用方向主要是尋找植物淀粉、纖維水解物，以廢糖蜜代替淀粉、糊精和葡萄糖，以工業(yè)葡萄糖代替食用葡萄糖。同時，使用稀薄的培養(yǎng)基，適當(dāng)減少碳氮配比。有機(jī)氮源代替主要為減少或代替黃豆餅粉、花生餅粉、食用蛋白胨和酵母粉等含有豐富蛋白質(zhì)的原料。代用的原料可以是棉籽餅粉、玉米漿、蠶蛹粉、雜魚粉或麩汁、飼料酵母、石油酵母、骨膠、酒糟，及各種食品工業(yè)下腳料等。PH的具體控制方法的具體控制方法1可在培養(yǎng)過程中加入酸或堿或流加某些營養(yǎng)物質(zhì)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH，但更應(yīng)在配制培養(yǎng)基時考慮所用營養(yǎng)物質(zhì)的組成成分，使PH值適合該微生物生長或合成代謝產(chǎn)物的需要。2還要注意有些營養(yǎng)物質(zhì)被利用后培養(yǎng)基的PH變化情況3控制PH最常用的方法是在培養(yǎng)基中添加具有一定緩沖能力的物質(zhì)作為營養(yǎng)物，如以磷酸鹽作為磷的成分；或者避免使用容易產(chǎn)生生理酸性或堿性使培養(yǎng)基PH波動太大的物質(zhì)。發(fā)酵生產(chǎn)中如何解決溶解氧不足發(fā)酵生產(chǎn)中如何解決溶解氧不足通氣可以供給大量的氧。攪拌能使新鮮氧氣更好地與培養(yǎng)液混合，保證氧的最大限度溶解。若培養(yǎng)罐深，攪拌轉(zhuǎn)速大，通氣管開孔小或多，氣泡在培養(yǎng)液內(nèi)停留時間就長，氧的溶解速度就大。利用透明顫菌血紅蛋白（VHB）基因工程菌解決溶解氧不足固體培養(yǎng)特點固體培養(yǎng)特點①原料以谷物和農(nóng)業(yè)廢物為主要原料，只需外加適量水分、無機(jī)鹽等。培養(yǎng)基組成簡單。②防止污染利用霉菌能在水分較低的基質(zhì)表面進(jìn)行增殖的特性，在這種條件下，細(xì)菌生長不好，因此不易引起細(xì)菌污染。③通氣無論淺盤或深層固體通風(fēng)制曲，可以在曲房周圍使用循環(huán)的冷卻增濕的無菌空氣來控制溫濕度，并能根據(jù)菌種在不同生理時期的需要，靈活加以調(diào)節(jié)。固體培養(yǎng)中，氧氣是由基質(zhì)粒子間空隙的空氣直接供給微生物，比液體培養(yǎng)時的用通氣攪

簡介：考試復(fù)習(xí)重點資料（最新版）考試復(fù)習(xí)重點資料（最新版）封面第1頁資料見第二頁資料見第二頁1緒論緒論?微生物學(xué)概述微生物學(xué)概述?微生物的定義微生物的定義?微生物的特點微生物的特點?微生物的分類微生物的分類?環(huán)境微生物學(xué)的研究對象和任務(wù)研究對象環(huán)境微生物學(xué)的研究對象和任務(wù)研究對象

簡介：中文中文8800字出處出處MACHLEIDTT,ROBERSM,HANSONGTPROTEINLABELINGWITHFLASHANDREASHJMETHODSINMOLECULARBIOLOGY,2007,356209220FLASH和REASH的蛋白標(biāo)記的蛋白標(biāo)記THOMASTHOMASMACHLEIDT,MACHLEIDT,MATTMATTROBERS,ROBERS,ANDANDGEORGEGEORGETTHANSONHANSON摘要摘要人健康或疾病，活細(xì)胞中的生化表象和表型變化，已成為調(diào)查和了解管理所有細(xì)胞生理功能分子機(jī)制的關(guān)鍵。報道者指出，已證明來自熒光蛋白（FPS）的基因編碼，在活細(xì)胞中的定位和相互作用的研究是非常有用的。然而，大尺寸和FP的光譜屬性對他的使用產(chǎn)生了一定的局限性。最近開發(fā)的熒光含砷U形（FLASH/四半胱氨酸序列）粘結(jié)劑技術(shù)成為一個用于FP蛋白標(biāo)記和細(xì)胞定位研究有前途的替代品。具有一個小分子檢測試劑盒的一個小的基因編碼的肽標(biāo)記組合，使得這項技術(shù)特別適合很難與作為分子標(biāo)記的熒光蛋白相聯(lián)系的活細(xì)胞的生化變化的調(diào)查。我們描述了這項技術(shù)的實際應(yīng)用于活細(xì)胞圖像的蛋白質(zhì)動力學(xué)。關(guān)鍵詞雙砷化合物，閃光熒光熒光蛋白網(wǎng)關(guān)高內(nèi)涵篩選活細(xì)胞成像LUMIO蛋白激酶C，蛋白標(biāo)記REASH試鹵靈標(biāo)簽四半胱氨酸序列。1、介紹介紹目前的高含量分析最主要的表現(xiàn)是，使用免疫熒光作為主要的標(biāo)簽/檢測方法為終點分析。雖然，由于它的靈活性和易用性使這方法很有價值，但是作為終點分析是有限的。在活細(xì)胞中蛋白質(zhì)的動態(tài)實時分析的能力是為深入了解與細(xì)胞行為與功能相關(guān)的復(fù)雜的生化和表型變化（1）。傳統(tǒng)上，在活細(xì)胞中蛋白質(zhì)的分析和檢測。主要是依靠作為基因編碼標(biāo)簽的熒光蛋白的使用（2）（FPS）。盡管其擁有對蛋白質(zhì)動力學(xué)分析的通用性和實用性，使用的FPS有一定的局限性。因為它們的FP大?。?8KD）有潛在的干擾融合部分的活動，定位，或結(jié)構(gòu)并且能夠，通常僅可以融合N或C為終點的蛋白質(zhì)（3）。此外，F(xiàn)PS只提供有限的有一股相對缺乏有用的紅色FP版本的頻譜品種，即使最近有報道增強紅色FP變種的發(fā)展（4）。近年來，為解決FPS的一些問題，一些替代活體細(xì)胞標(biāo)記方法已被引入（如頻譜的限制）（5,6）。然而，所有已公布的方法，都依靠相當(dāng)可觀的多肽的融合蛋白，因此，與FP的共享，具有靶蛋白功能的立體標(biāo)記存在潛在干擾的缺點。最近在加州大學(xué)圣迭戈分校的ROGERTSIEN小組，開發(fā)出一種在活細(xì)胞特別標(biāo)記蛋白方法，使用親和力很高的小肽標(biāo)記和一個小分子的標(biāo)簽（7）。這項技術(shù)利用高親和力的四半胱氨酸序列（TC），由兩個氨基酸間隔區(qū)分離的兩個半胱氨酸組成，在還原條件下形成有機(jī)砷化合物（圖1）。成功地利用了這一原則產(chǎn)生熒光砷發(fā)夾粘結(jié)劑（FLASH），包含4和5位置四半胱氨酸替換膜的滲透染料熒光衍生。兩個半胱氨酸對結(jié)合具有高親和力（已在REF8有記錄，通過四個可逆的共價鍵的形成一個有效的離解常數(shù)1011中號的FLASH組（圖1）。融合了TC標(biāo)記的目標(biāo)蛋白質(zhì)的基因，在BIARSENIC標(biāo)記熒光染料培養(yǎng)，活細(xì)胞中允許特定的標(biāo)記的融合蛋白7）。最早的的TC標(biāo)記被設(shè)計成為短公認(rèn)的Α螺旋的圖案，依從的是一個Α螺旋結(jié)構(gòu)提供了一個最佳的結(jié)合環(huán)境的假設(shè)（7）。然而，進(jìn)一步系統(tǒng)調(diào)查不同的間隔區(qū)的TC圖案，破解插入螺旋甘氨酸和脯氨酸，導(dǎo)致大大增強FLASH對TC圖案的親和力（8）。這項技術(shù)的另一個方面是，顯示了一點熒光的未綁定的，直到它綁定到TC的圖案，結(jié)果會導(dǎo)致熒光約束力的大量增加（7）。TSIEN實驗室通過BIARSENICAL染料發(fā)展，擴(kuò)大兩個TC標(biāo)記的顏色范圍，試鹵靈派生的紅色熒光染料REASH和藍(lán)色熒光BIARSENICAL的CHOXASH，3,6二羥基酮衍生物（8）。這項技術(shù)也被應(yīng)用于蛋白質(zhì)的構(gòu)象白。特別注意的是給出的標(biāo)記過程。我們展示了大量例子強調(diào)這個活細(xì)胞標(biāo)記方法的多功能性，如糖皮質(zhì)激素受體，Β微管蛋白和蛋白激酶C?。≒KC?。┑臉?biāo)簽的數(shù)量，證明在活細(xì)胞中TC標(biāo)記蛋白質(zhì)成功檢測（圖2AC的）。31、TC標(biāo)記的融合蛋白的產(chǎn)生和表達(dá)標(biāo)記的融合蛋白的產(chǎn)生和表達(dá)蛋白質(zhì)的FLASH檢測需要生成一個表達(dá)式構(gòu)建含有該基因的興趣和融合或集成的TC標(biāo)簽。為TC標(biāo)簽的基本核心序列CCXXCC的。為XX間隔使用的最常見的氨基酸是脯氨酸和甘氨酸（INVITROGEN的表達(dá)載體中也使用），但使用不同的墊片已報道（8）。TC的標(biāo)簽可以很容易地添加到任何的N或C末端的靶蛋白。此外，小規(guī)模的TC標(biāo)簽往往允許其插入到目標(biāo)蛋白的特定領(lǐng)域，而不會干擾蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)或功能，為作為甘酸A2A腺苷受體（10）和哺乳動物細(xì)胞維甲酸結(jié)合蛋白（20，21,23）。這些研究表明，短的Α螺旋或循環(huán)的是最適合整合/替代的TC標(biāo)記的地點?？傮w而言，TC標(biāo)簽提供出色的靈活性給標(biāo)記放置，結(jié)合潛在存在的總體目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的最小干擾。小尺寸的TC標(biāo)記也允許通過PCR和克隆何想要表達(dá)載體的PCR產(chǎn)物任，使用標(biāo)準(zhǔn)DNA重組方法。蛋白質(zhì)和TC標(biāo)記之間的間隔序列通常不是必需的。一個額外的選項是INVITROGEN公司的GATEWAY?系統(tǒng)的使用，包括哺乳動物已經(jīng)含有N或C末端TC標(biāo)簽的表達(dá)載體。網(wǎng)關(guān)系統(tǒng)允許快速和方便的新一代N或C端TC融合蛋白使用基于Λ噬菌體的位點特異性重組。INVITROGEN公司的網(wǎng)站上可以找到有關(guān)的的網(wǎng)關(guān)克隆系統(tǒng)和網(wǎng)關(guān)盧米奧載體。與任何其他的融合結(jié)構(gòu)，適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)，定位，功能的融合蛋白一樣，在實驗室使用其結(jié)構(gòu)前需要對其游離蛋白進(jìn)行驗證（見注2）。TC融合蛋白的穩(wěn)定和瞬間表達(dá)，合適各種各樣的生物和細(xì)胞株（見表1）。我們很快采用標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)譯方法?脂質(zhì)體和脂質(zhì)體2000）的表達(dá)了在各種不同的細(xì)胞系（HEK293，HELA細(xì)胞，CHO細(xì)胞，A549細(xì)胞和NIH3T3）一些不同的蛋白質(zhì)（結(jié)構(gòu)蛋白激酶，GPCRS的，和核激素受體，等），沒有遇到關(guān)于蛋白表達(dá)或細(xì)胞活力任何問題，。以下協(xié)議為下一代提供指導(dǎo)和怎樣使用TC標(biāo)記的融合蛋白。圖2，使用FLASH/REASH染色的活細(xì)胞成像蛋白質(zhì)動力學(xué)的例子。CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染（一）糖皮質(zhì)激素受體TC（GRTC），（二）蛋白激酶CΑTC或（三）TC微管蛋白Α。之后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到腔蓋玻片上，細(xì)胞2微米FLASH或REASH達(dá)60分鐘且保持在37°C，和隨后用含有200ΜM的EDT2的OPTIMEM清洗三次。（一）與糖皮質(zhì)激素受體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞不及時治療或20分鐘或者10ΜM的地塞米松治療。地塞米松結(jié)合并激活的GRGRTC的從細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞核的轉(zhuǎn)運。（二）轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與PKC留給未經(jīng)治療或治療20分鐘為1ΜM。PMA處理導(dǎo)致激活蛋白激酶C1，隨后從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運到質(zhì)膜。（三）與TCΒ微管蛋白的轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，不及時治療或治療60分鐘與10毫米長春新堿誘導(dǎo)微管解聚和短期的微管蛋白聚合的外觀。兩個圖像顯示樣品內(nèi)的不同領(lǐng)域。圖像要求使用DELTAVISION圖像復(fù)原系統(tǒng)（奧林巴斯IX71倒置顯微鏡配備載脂蛋白60，不適用14目標(biāo)）。所有圖像進(jìn)行反皺處理。32、代、代TC標(biāo)簽的蛋白激酶標(biāo)簽的蛋白激酶CΑ表達(dá)構(gòu)建Α表達(dá)構(gòu)建我們正在使用的蛋白激酶CΑ作為說明表達(dá)步驟一個例子，包括傳代，表達(dá)和編碼TC標(biāo)簽的蛋白質(zhì)。在這個例子中，蛋白激酶CΑ的DNA被PCR直接克隆，從HELA細(xì)胞表達(dá)的基因，通過使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)。321、克隆1、對于傳代的C端TC融合蛋白結(jié)構(gòu)我們修改了INVITROGEN的哺乳動物表達(dá)載體?/V5的PCDNA6有它的TC標(biāo)記來代替。2、全長的蛋白激酶CΑ片段被克隆成修改HINDIII和XHOI位的PCDNA6?/V5的（TC）載體。列入V5的標(biāo)簽不干擾細(xì)胞中的靶蛋白的編碼或功能，此外用于表達(dá)的

簡介：10中文中文3340字畢業(yè)論文（設(shè)計）外文翻譯譯文題目譯文題目全自動生化分析儀常見故障診斷、分析與維修（側(cè)重維修）學(xué)生姓名學(xué)生姓名學(xué)號號專業(yè)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程方向向醫(yī)療器械指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師2008年12月24日12CLASSIFYINGSUCHDISEASES,ANDUNDERAPPROPRIATECIRCUMSTANCES,RESULTSAREUSEDFORDIAGNOSTICPURPOSESINRECENTYEARS,AUTOMATIONINCLINICALCHEMISTRYHASPROGRESSEDWITHACHANGEFROMRIGIDTOVERYFLEXIBLEINSTRUMENTSAUTOMATIONOFCLINICALINSTRUMENTSHASBROUGHTABOUTAREVOLUTIONINTHEFIELDOFMEDICALINSTRUMENTATIONITHASREDUCEDTHELOADONCLINICALLABORATORIESTOAGREATEXTENTBYREDUCINGTHETIMETAKENINTHETESTANDMINIMIZINGTHEINVOLVEMENTOFLABORATORYSTAFFINSTRUMENTDEVELOPEDISCLASSIFIEDASSEMIAUTOMATEDANALYSER2ANDHASADVANTAGESOFPRECISIONANDACCURACYTHESESYSTEMSAREUSEDINHOSPITALSTOTESTVARIOUSBLOODBIOCHEMICALPARAMETERSALLPRIMARYHEALTHCENTRES,COMMUNITYHEALTHCENTRES,ANDDISTRICTHOSPITALSARETHEPOTENTIALUSERSOFTHISMACHINE2MATERIALSANDMETHODS21THEINSTRUMENTIDESIGNPRINCIPLETHEINSTRUMENTISDESIGNEDUSINGTHEPRINCIPLEOFABSORBANCETRANSMITTANCEPHOTOMETRYACCORDINGTOLAMBERTANDBEER’FIGURE1SCHEMATICOFLAMBERTANDBEER’SLAWFIGURE2RELATIONBETWEENPERCENTTRANSMISSIONANDCONCENTRATIONLAW3,WHENMONOCHROMATICLIGHTISPASSEDTHROUGHCOLOUREDSOLUTION,THEINTENSITYOFTHETRANSMITTEDLIGHTDECREASESEXPONENTIALLYWITHTHEINCREASEINCONCENTRATIONOFTHEABSORBINGSUBSTANCETHEVALUEOFABSORPTIONOFLIGHTENERGYISDEPENDENTONTHENUMBEROFMOLECULESPRESENTINABSORBINGMATERIALANDTHETHICKNESSOFTHEMEDIUMTHUS,INTENSITYOFLIGHTENERGYLEAVINGTHEABSORBINGSUBSTANCEISUSEDASANINDICATIONOFCONCENTRATIONOFTHATPARTICULARSUBSTANCEASSHOWNINFIGURES1AND2,IFI0ISTHEINTENSITYOFINCIDENTLIGHTINCOLOUREDSOLUTIONANDITISTHETRANSMITTEDLIGHT,THENACCORDINGTOTHISLAWITI0EKCT1

簡介：附錄Ⅳ英文文獻(xiàn)及翻譯附錄Ⅳ英文文獻(xiàn)及翻譯BIOLOGICALEFFECTSOFTHEMAGNETICSTIMULATIONONTHETOADHEARTHONGWEILEI,YUYUANDU,YINALI,CHUNLINGLIU,XUWAN2007IEEE/ICMEINTERNATIONALCONFERENCEONCOMPLEXMEDICALENGINEERINGCME2007INSTITUTEOFBIOMEDICALENGINEERING,NORTHEASTERNUNIVERSITY,SHENYANG,LIAONING110004,PRCHINAABSTRACTWESTIMULATEDTHEEXPOSEDTOADHEARTBYALOWFREQUENCYANDHIGHENERGYMAGNETICBYANALYZETHEDATAOFTHISEXPERIMENT,ITSHOWSTHATTHEPULSATINGOFTHEWEAKTOADHEARTWOULDMAKECHANGEAFTERSTIMULATEDBYMAGNETICWEAKHEARTBEATSTRENGTHENED,THESINGLEPEAKCURVEWOULDBECOMETHETWOPEAKSCURVEWITHATRIAWAVEANDVENTRICLEWAVEAFTERTHEMAGNETICSTIMULATIONBUTTHECYCLINGOFRHYTHMICPULSATILECURVEOFTOADDOESNTCHANGEIINTRODUTIONALLLIFEFORMSHAVEMAGNETISMALLKINDSOFMAGNETICFIELDWOULDHAVESOMEEFFECTSONTHECONFIGURATIONANDACTIVITIESOFLIFEFORMSTHATWHICHEVERENVIRONMENTALMAGNETIC,ADDITIONALMAGNETICORINSIDEMAGNETICOFORGANISMTHEBIOLOGICEFFECTSARERELATEDTOTHECHARACTERISTICSANDTHEINTENSIONOFTHEMAGNETICFIELD,ASWELLASTHESPECIESANDTHETISSUESOFTHELIFEFORMSTHEEXPERIMENTATIONSHOWEDTHATMAGNETISMSTIMULATIONINSOMERANGEWOULDCONTROLTHEGROWTHOFRATTUMOUR,WHATEVERTHEYAREINOROUTTHEBODYMUCHMORETHEYCANINDUCETHECANCERCELLSDEAD30MTMAGNETICSTIMULATIONWOULDINCREASETHECONTENTOFNOINTHELIVERANDTHEKIDNEYMAGNETICALSOCANIMPROVETHEACTIVITYOFSOMEENZYMEANDPROMOTETHEREGENERATIONOFNERVETISSUECELLWOULDINCREASE,THEBONESWOULDBECONCRESCENCE,THESCARWOULDBEREHABILITATETHEBLOODRHEOLOGYANDBLOODCELLNUMBERBOTHOFHUMANANDRATWOULDCHANGEOBVIOUSLY,DITHEBLOODMUCOSITYWOULDBELOWHEARTISTHEMOSTIMPORTANTAPPARATUSOFLIFEITPULSATESDAYANDNIGHTHEARTONCESTOPPULSATING,THELIFEFORDANGERNUMEROUSSCHOLARPAYSATTENTIONTOTHEROLEOFMAGNETICFIELDBUTTHEYJUSTSTUDIEDTHEEFFECTSOFMAGNETICSTIMULATIONOFTHEHEARTPACEMAKERTHEEXPERIMENTSABOUTDIRECTEFFECTSOFSTIMULATEHEARTBYMAGNETICISVERYMADEBYOURSELVES③CARDIOMUSCULARTRANSDUCER④RINGERSOL⑤BATRACHIAINSTRUMENTS⑥CLIPOFFROGHEART⑦COTTONTHREAD?BURETTEBEXPERIMENTANIMALSTOADSIIIMETHODADESTROYTHEBRAINANDTHESPINALCORDOFTHETOADBYSTYLETPENETRATEINTOTHEOCCIPITALAPERTUREUPRIGHTWITHSTYLET,DESTROYEDTHEBRAINUPWARDS,TAKEBACKTHESTYLETANDDESTROYTHESPINALDOWNWARDSIFTHELIMBOFTOADWERERELAXED,ITSHOWEDTHATTHEBRAINANDSPINALWEREDESTROYEDCOMPLETELYBEXPOSETHETOADHEARTMAKETHETOADLYINGONITSBACKONTHEWINDINGCENTERTHEMAGNETICASPECTISUPRIGHTTHROUGHTHETOADHEARTCUTTHEVENTRALSKINOFTOAD,SNIPTHEBREASTBONE,EXPOSETHERATHEARTNIPTHEHEARTTIPBYCLIPCAREFULLYMAKETHECOTTONTHREADTIEDWITHTHECLIPOFFROGHEARTHELINKEDWITHTHECARDIOMUSCULARTRANSDUCERDONOTMAKETHETOADHEARTLEAVETHORAX,ORITWOULDDISTURBTHEEXPERIMENTRESULTSCNOTEDTHERESULTCONNECTTHECARDIOMUSCULARTRANSDUCERWITHTHECOMPUTERTAKENOTESTHECURVEOFTOADHEARTWITHOUTGIVINGTHESTIMULATEOFMAGNETICFIELDDAFTERTHREEMINUTES,NOTEDTHEWEAKPULSATILECURVEEMAKETHEMAGNETICINTENSION10T,ELECTRICIZE10SSTIMULATETHETOADHEARTANDRECORDTHEPULSATILECURVEIVRESULTSTHEABSCISSAOFCARDIACRHYTHMICPULSATILECURVEISTIME,THEORDINATEISCONSTRICTIONPOWERTAKENOTESFORTHEPULSATILECURVEOFTOADHEARTTHATEXPOSEDJUSTWECANKNOWTHERHYTHMICPULSATILECYCLEOFTHETOADHEARTIS15SFROMFIG1WHICHSHOWTHECARDIACRHYTHMICPULSATILECURVEOFTHETOADWHICHWASEXPOSEDTHEHEARTJUSTNOWTHEREARETWOWAVESINEACHCYCLE,ONEISATRIAWAVE,THEOTHERISVENTRICLEWAVETHEATRIAWAVEIS05SANDTHEVENTRICLEWAVEIS10STHECONSTRICTIONPOWEROFATRIAISLESSTHANTHATOFVENTRICLETHEAMPLITUDEOFCONSTRICTIONPOWEROFVENTRICLEISTHE2TIMESOFTHEATRIA

簡介：中文中文4110字出處出處JNATMED201064182–186用HPLC–DAD–ESI–MS/MS方法對黃芪抗病毒活方法對黃芪抗病毒活性部位進(jìn)行植物化學(xué)研究性部位進(jìn)行植物化學(xué)研究LITANGYINGLIUYEINGWANGCHUNLINLON摘要黃芪在中國是一種用來治療疾病的常用中草藥。為了弄清黃芪的抗病毒成分，我們用HPLC–DAD–ESI–MS/MS分離和鑒定了黃芪提取物的幾種抗病毒的活性成分。通過比較已發(fā)表文獻(xiàn)的保留時間和MS數(shù)據(jù)，共鑒定出18個化合物，包括11個黃酮和7個皂苷類化合物。這個研究為快速鑒別傳統(tǒng)中藥的生物活性成分提供了一種途徑。關(guān)鍵詞黃芪抗病毒的活性黃酮皂苷前言中藥廣泛用于疾病的治療，為中華民族的繁榮和發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。然而，它的治療機(jī)制卻沒有弄清。現(xiàn)在中藥的復(fù)雜成分和它的有效性相關(guān)的提法被廣泛接受。因此，為了保證中藥在臨床上的可靠性，更好的弄清藥物活性的基礎(chǔ)并且提高產(chǎn)品的質(zhì)量，闡明和分析中藥的活性成分是很有必要的。由于中藥成分的復(fù)雜性使這一領(lǐng)域的研究有很大挑戰(zhàn)性。因此，鑒別有效成分是很重要的?，F(xiàn)在，HPLC–MSN已經(jīng)被證明是中藥提取鑒定的一個有力工具。這個方法在靈敏度和特異性方面有優(yōu)勢。黃芪，是莢膜黃芪的干燥根，在中國叫做黃芪，是廣為人知的一種補氣藥。黃芪擁有許多生物學(xué)功能，包括保肝，抗氧化，抗病毒，抗高血壓和刺激免疫應(yīng)答等。根據(jù)報道黃芪含有三萜皂苷，異黃酮類和多糖等類成分。在這個研究研究中，我們對黃芪的有抗炎活性的部分進(jìn)行了植物化學(xué)成分的研究。采用HPLC–DAD–ESI–MS/MS技術(shù)，比對已有化合物的UV光譜和MS數(shù)據(jù)共鑒別出18個化合物，包括11個黃酮類化合物和7個皂苷類化合物。這個結(jié)果有助于人們對黃芪的臨床用藥有更好的理解，并且有利于為這個傳統(tǒng)中草藥提供更好的質(zhì)量控制方法。材料和方法材料和方法化學(xué)制品和試劑司。培養(yǎng)基放在37°C，5CO2條件的培養(yǎng)箱中。副流感病毒，呼吸道合胞體病毒，單純皰疹病毒1，單純皰疹病毒2，腺病毒3和腺病毒7由中國中藥研究所，中藥研究會提供。病毒在單層HEP2細(xì)胞中繁殖并儲存在70°C的冰箱中。體外測定抗病毒活性體外測定抗病毒活性被測成分用DMSO溶解并濃縮到10MG/ML。工作溶液通過用MEM雙重連續(xù)稀釋的方法準(zhǔn)備好并加入到四個孔中，200ΜL/WELL。正常細(xì)胞做對照。四天的培養(yǎng)過程中，通過光學(xué)顯微鏡觀察致細(xì)胞病變效應(yīng)。通過REED–MUENCH方法，黃芪的濃縮物的CC50被測定出來。HEP2細(xì)胞生長至匯合，在滴度100CCID50下被病毒感染。在15小時長的病毒吸收期后，含病毒的介質(zhì)換成新鮮介質(zhì)，被測部位經(jīng)過一系列的稀釋同時加入到培養(yǎng)基中。感染細(xì)胞不接受控制病毒的藥物治療。當(dāng)傳染病后4896小時百分百的細(xì)胞病變效應(yīng)被檢測到后，能獲得百分之五十的抑制CPE的藥物濃度稱為半抑制濃度，通過三次獨立測定得到。選擇性指數(shù)，或者CC50和IC50的比也能計算被測部分的抗病毒活性。利巴韋林用做陽性對照。抗病毒活性的生物測定方法抗病毒活性的生物測定方法抗副流感病毒活性測試用黃芪乙醇提取物和過大孔樹脂后的水，30乙醇和70乙醇的洗脫部分。四部分的半抑制濃度分別為207±52,1352±46,484±39,和158±12ΜG/ML。相應(yīng)的四部分的選擇性指數(shù)分別為58±06,15±04,31±03和85±06。這表明70乙醇從D101上的洗脫的部位是黃芪最有抗病毒活性的部分。百分之七十部分的一系列的抗病毒活性列在表一中。結(jié)果表明百分之七十的部位對呼吸道病毒，單純皰疹病毒1，單純皰疹病毒2有適度的活性。對腺病毒3，腺病毒7和副流感病毒有重要的抑制活性。結(jié)果表明百分之七十的部分是黃芪的抗病毒活性的基礎(chǔ)。表1百分之七十部位在HEP2細(xì)胞中的抗病毒活性。70FRIBAVIRINVIRUSIC50TG/MLSIIC50TG/MLSIPARAINFLUENZAVIRUS141±1185±06773±5894±07RESPIRATORYSYNCYTIALVIRUS571±5621±021137±8564±04HERPESSIMPLEXVIRUS1414±4729±031433±5851±02HERPESSIMPLEXVIRUS2428±4128±031283±4557±02ADENOVIRUS3226±0853±02953±10577±07

簡介：本科畢業(yè)設(shè)計外文文獻(xiàn)及譯文文獻(xiàn)、資料題目FRUITANDVEGETABLESINTHEAMERICANDIETDATAFROMTHENHANES11SURVEY文獻(xiàn)、資料來源AMERICANJOURNALOFPUBLICHEALTH文獻(xiàn)、資料發(fā)表（出版）日期1990院（部）市政與環(huán)境工程學(xué)院專業(yè)生物工程班級生物092姓名吳世英學(xué)號2009041150指導(dǎo)教師張超翻譯日期201366山東建筑大學(xué)畢業(yè)設(shè)計外文文獻(xiàn)及譯文1HUMANSERVICESDHHSRECOMMENDASPARTOFTHEIRFOODGUIDANCESYSTEMTHATTHEDAILYDIETINCLUDETWOTOTHREESERVINGSOFFRUITANDTHREETOFIVESERVINGSOFVEGETABLES45THESESPECIFICRECOMMENDATIONSAREINTHECONTEXTOFGENERALRECOMMENDATIONSFORADIETTHATMEETSNUTRIENTREQUIREMENTS,DOESNOTINCLUDEEXCESSIVEAMOUNTSOFFATINPARTICULARSATURATEDFATS,ANDISCONSISTENTWITHMAINTAININGDESIRABLEWEIGHTITISIMPORTANTTHEREFORETODETERMINEWHATRELATIONINCREASEDFRUITANDVEGETABLECONSUMPTIONMIGHTHAVE,NOTONLYTOINTAKEOFOBVIOUSLYRELATEDNUTRIENTSSUCHASVITAMINSAANDCBUTALSOTOFATINTAKEANDMAINTENANCEOFAPPROPRIATEBODYWEIGHTINTHENHANESIIDATA,COLLECTEDBETWEEN1976AND1980,ITISPOSSIBLETOEXAMINETHESERELATIONSHIPSINSELFSELECTEDDIETSTHATWEREACTUALLYCONSUMEDDURINGA24HOURPERIODBYAREPRESENTATIVESAMPLEOFUSADULTSTHEARTICLEMENTIONEDABOVEDESCRIBEDTHEPROPORTIONSOFTHEUSPOPULATIONTHATCONSUMEDANYAMOUNTOFAGIVENFOOD,HOWEVERLARGEORSMALLNOATTEMPTWASMADETODETERMINETHENUMBEROFSERVINGSCONSUMEDINTHEPRESENTINQUIRYWEESTIMATETHENUMBEROFSERVINGSCONSUMED,TAKINGPORTIONSIZEINTOACCOUNTWEALSOEXAMINETHEINTAKEOFCALORIES,FAT,FIBER,ANDVITAMINSAANDCINTHEDIETSOFPERSONSCONSUMINGVARIOUSNUMBERSOFSERVINGSOFFRUITANDVEGETABLESWHILEITISOBVIOUSTHATINTAKEOFVITAMINSAANDCWOULDINCREASEWITHINCREASINGNUMBERSOFSERVINGS,THERELATIVECONTRIBUTIONOFFRUITVERSUSVEGETABLESISNOTWELLKNOWN,NORISTHENUTRIENTINTAKEACTUALLYACHIEVEDINSELFSELECTEDDIETSSIMILARLY,THEDIETARYFIBERINTAKECONTAINEDINDIETSINCLUDINGMULTIPLESERVINGSOFFRUITANDVEGETABLESMAYBEINADEQUATELYAPPRECIATEDBYTHEGENERALPUBLICMETHODSTHENHANESIISURVEYWASCONDUCTEDBYTHENATIONALCENTERFORHEALTHSTATISTICSBETWEEN1976AND19806AHIGHLYSTRATIFIEDMULTISTAGEPROBABILITYDESIGNWASUSEDTOOBTAINAREPRESENTATIVESAMPLEOFTHECIVILIANNOINSTITUTIONALIZEDPOPULATION,AGESSIXMONTHSTO74YEARSWEREPORTON10,313WHITEAND1,335BLACKADULTSAGES19TO74WEEXCLUDEDOTHERRACESBECAUSEOFSMALLNUMBERS,ASWELLASIMPUTED,UNRELIABLE,ORSURROGATEDATARESULTSAREBASEDONWEIGHTEDDATA,PERMITTINGINFERENCEABOUTTHETOTALBLACKANDWHITENONINSTITUTIONALIZEDUSPOPULATION7GROUPMEANSANDSTANDARDERRORSWERECALCULATEDUSINGSOFTWAREAPPROPRIATEFORCOMPLEXSAMPLESURVEYDATA8STANDARDERRORSAREFREQUENTLYLARGEFORBLACKS,DUETOTHEIRSMALLNUMBERINTHESURVEYTHEREFORE,RESULTSFORBLACKSSHOULDBEVIEWEDWITHCAUTIONCONVERSELY,

簡介：中文中文4940字出處出處ACOSTAJ,CARPIOY,BORROTOI,ETALMYOSTATINGENESILENCEDBYRNAISHOWAZEBRAFISHGIANTPHENOTYPEJJOURNALOFBIOTECHNOLOGY,2005,1194324331外文翻譯外文翻譯RNAI沉默肌肉生長抑制素基因致斑馬魚表型巨大化沉默肌肉生長抑制素基因致斑馬魚表型巨大化JANNELACOSTA1，YAMILACARPIO1，INGRIDBORROTO，OSMANYGONZ′ALEZ，MARIOPABLOESTRADA水產(chǎn)養(yǎng)殖生物技術(shù)項目，動物生物技術(shù)部門，遺傳工程和生物技術(shù)中心，郵政信箱6162，哈瓦那10600，古巴2004年12月23日收到；修訂后的形式2005年4月15日在收到摘要摘要肌肉生長抑制素是轉(zhuǎn)化生長因子Β（TGFΒ）家族的成員之一，是骨骼肌生長和發(fā)育的一個負(fù)調(diào)節(jié)因子。最近，據(jù)報導(dǎo)，表達(dá)肌肉生長抑制素前體蛋白的轉(zhuǎn)基因斑馬魚骨骼肌的纖維增加。其它新的研究結(jié)果表明，除了抑制增殖及分化，肌肉生長抑制素在肌細(xì)胞生成中也扮演著一個重要角色。我們已經(jīng)研究了斑馬魚雙鏈RNADSRNA抑制肌肉生長抑制素功能的能力。通過顯微注射羅非魚對應(yīng)于生物活性C端結(jié)構(gòu)域，從肌肉生長抑制素蛋白第268個胺基酸的密碼子到端密碼子的DSRNA，使實驗魚體重增加。在早期的發(fā)育階段注入DSRNA，可使斑馬魚肌肉發(fā)生增生或肥大。此外，干擾基因的影響表現(xiàn)出很強的DSRNA量的依賴性。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞斑馬魚，肌肉生長抑制素，核糖核酸干擾，基因沉默，肥大，增生1．介紹．介紹肌肉生長抑制素MSTN是轉(zhuǎn)化生長因子Β（TGFΒ）的成員之一，它對一些哺乳動物物種的骨骼肌生長起著關(guān)鍵的負(fù)調(diào)節(jié)作用。攜帶MSTN自然突變基因的“雙肌”品種的牛比標(biāo)準(zhǔn)品種有更多的肌肉LEE和MCPHERRON，1997年；KAMBADUR等人，1997年；GROBET等人，1997年，1998年。敲除MSTN基因的小鼠骨骼肌肉急劇增加，并最終導(dǎo)致其增生和肥大MCPHERRON等人，1997年。2001年，LEE和MCPHERRON的報告指出，轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)MSTN的原結(jié)構(gòu)域，卵泡抑素或啟動素受體IIB型ACTRIIB在肌肉細(xì)胞中顯負(fù)性，增強肌肉的生長，各方面都類似于被敲除MSTN基因的小鼠。此外，由于MSTN的抑制，轉(zhuǎn)基因魚MSTN表達(dá)原結(jié)構(gòu)下放置34小時，制作DSRNA。經(jīng)退火的RNA（DSRNA）的溶液加入RNASEA（05克/毫升）在37℃放置15分鐘，降解至單鏈RNA。在瓊脂糖凝膠上對不同的物種進(jìn)行了檢查。所有12細(xì)胞階段的胚胎注射5個DSRNA分子/胚胎（注射液1FG/L）和5106個DSRNA分子/胚胎（注射液1NG/L）。陰性對照組胚胎顯微注射載體相同的菌種（PBS1，137MM氯化鈉，27MM氯化鉀，43MM磷酸氫二鈉7H2O，PH值73）。22RTPCR通過使用TRI試劑（SIGMA公司），按照制造商的說明提取受精24小時后的胚胎HPF的總RNA。CDNA第一鏈通過使用逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)（PROMEGA公司）合成20_L，從總RNA的5_G逆轉(zhuǎn)錄（RT）反應(yīng)。PCR進(jìn)行20_L以15稀釋比率的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。方法與AMALI等的（2004年）相同，使用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到496BP的斑馬魚MSTN和最大476BP的CDNA（用于作為內(nèi)標(biāo)物模板量的差異正常化）。PCR程序為預(yù)變性94℃下2分鐘；MSTN進(jìn)行35個循環(huán)，最大的片斷進(jìn)行30個循環(huán)；在94℃下進(jìn)行30秒，55℃下進(jìn)行30秒和72℃下進(jìn)行1分鐘；最后延伸時間為72℃下7分鐘。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行1％凝膠電泳。使用1D圖像分析軟件（柯達(dá)）進(jìn)行定量分析，由頻帶的強度計算基因表達(dá)的相對值。研究確定基因表達(dá)周期數(shù)的驗證測試，在該測試中進(jìn)行所描述的PCR反應(yīng)，但在不同的周期數(shù)終止。構(gòu)建了在不同PCR循環(huán)中產(chǎn)生的穩(wěn)定的PCR產(chǎn)物量的檔案，并在擴(kuò)增曲線的指數(shù)區(qū)域內(nèi)選擇所使用的周期數(shù)。這是為了可以確保用PCR產(chǎn)物的量反映原樣品中模板的量。23．成長性評價和肌肉組織學(xué)分析．成長性評價和肌肉組織學(xué)分析要確定所有顯微注射30天，60天和75天后魚的體重。對各組中的20條個體的魚，各取肌肉組織，制成常規(guī)的石蠟切片，用甲醛固定10小時后，通過蘇木精曙紅染色法（簡稱HE染色法），進(jìn)行肌肉組織學(xué)分析。選擇腹鰭底部的第一棘的垂直部分的肌纖維進(jìn)行定量分析。對染色部分進(jìn)行了拍照，并使用DIGIPAT程序（33版本，EICISOFT，古巴）將圖像進(jìn)行分析。確定一個固定的放大倍數(shù)（20倍），在顯微鏡下對一個給定的區(qū)域內(nèi)纖維的總數(shù)進(jìn)行計數(shù)。24．統(tǒng)計分析．統(tǒng)計分析誤差條指示平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。（）表示P001，（）表示P005，顯微注射組作為學(xué)生T檢驗的對照組。3．結(jié)果與討論．結(jié)果與討論最近羅非魚（奧利亞羅非魚）的MSTN基因（GENBANK登錄號AF197193）被發(fā)現(xiàn)并克隆。與羅非魚的核酸序列和氨基酸序列是高度同源的斑馬魚，DNA序列同源性約是羅非魚的74％（RODGER等人，2001年）。

簡介：本科畢業(yè)論文外文文獻(xiàn)及譯文文獻(xiàn)、資料題目RENEWABLEENERGY文獻(xiàn)、資料來源期刊（著作、網(wǎng)絡(luò)等）文獻(xiàn)、資料發(fā)表（出版）日期2010727院（部）熱能工程學(xué)院專業(yè)熱能與動力工程外文文獻(xiàn)及譯文2THATMAYTAKELONGERTODEVELOPANDSTRONGERWILLPOWERTOIMPLEMENTAWEDGEREPRESENTSACARBONCUTTINGSTRATEGYTHATHASTHEPOTENTIALTOGROWFROMZEROTODAYTOAVOIDING1BILLIONTONSOFCARBONEMISSIONSPERYEARBY2055ITHASBEENESTIMATED3THATATLEAST15STRATEGIESARECURRENTLYAVAILABLETHAT,WITHSCALINGUP,COULDREPRESENTAWEDGEOFEMISSIONSREDUCTIONALTHOUGHANUMBEROFEMISSIONREDUCTIONOPTIONSAREAVAILABLETOTHEINDUSTRY,MANYOFTHEMSTILLFACEFINANCIALPENALTIESFORIMMEDIATEIMPLEMENTATIONSOMEMEASURESAREVERYSITE/LOCATIONSPECIFICWHILEOTHERSARESTILLINANEARLYSTAGEOFDEVELOPMENTCARBONDIOXIDESEQUESTRATIONORZEROEMISSIONPOWERPLANTSREPRESENTTHEFUTUREOFACO2EMISSIONSFREEPOWERSECTOR,BUTTHEYWILLTAKEYEARSTOCOMETOTHEMAINSTREAMMARKETTHECOSTOFCO2CAPTUREANDSEQUESTRATIONISINTHERANGEOF40E60US/TONOFCO2,DEPENDINGONTHETYPEOFPLANTANDWHERETHECO2ISSTORED4,5THISISASIGNIFICANTECONOMICBURDENONTHEINDUSTRY,ANDCOULDPOTENTIALLYESCALATETHECOSTOFELECTRICITYPRODUCEDBYASMUCHAS60CANADAHASVASTAMOUNTSOFBIOMASSINITSMILLIONSOFHECTARESOFMANAGEDFORESTS,MOSTOFWHICHREMAINUNTAPPEDFORENERGYPURPOSESCURRENTLY,LARGEQUANTITIESOFTHERESIDUESFROMTHEWOODPRODUCTSINDUSTRYARESENTTOLANDFILLORAREINCINERATED6INTHEAGRICULTURALSECTOR,GRAINCROPSPRODUCEANESTIMATED32MILLIONTONSOFSTRAWRESIDUEPERYEARALLOWINGFORASTRAWRESIDUEOF85REMAININGINTHEFIELDSTOMAINTAINSOILFERTILITY,5MILLIONTONSWOULDSTILLBEAVAILABLEFORENERGYUSEDUETOANINCREASEINLANDPRODUCTIVITY,SIGNIFICANTAREASOFLANDINCANADA,WHICHWEREEARLIERFARMED,ARENOLONGERFARMEDTHESELANDSCOULDBEPLANTEDWITHFASTGROWINGENERGYCROPS,LIKESWITCHGRASSOFFERINGPOTENTIALLYLARGEQUANTITIESOFBIOMASSFORENERGYPRODUCTION6LIVINGBIOMASSPLANTSABSORBCO2FROMTHEATMOSPHERESO,ITSCOMBUSTION/GASIFICATIONFORENERGYPRODUCTIONISCONSIDEREDCARBONNEUTRALTHUSIFACERTAINAMOUNTOFBIOMASSISFIREDINANEXISTINGFOSSILCOAL,COKEOROILFUELFIREDPLANTGENERATINGSOMEENERGY,THEPLANTCOULDREDUCEFIRINGTHECORRESPONDINGAMOUNTOFFOSSILFUELINITTHUS,APOWERPLANTWITHINTEGRATEDBIOMASSCOFIRINGHASALOWERNETCO2CONTRIBUTIONOVERCONVENTIONALCOALFIREDPLANTSBIOMASSCOFIRINGISONETECHNOLOGYTHATCANBEIMPLEMENTEDIMMEDIATELYINNEARLYALLCOALFIREDPOWERPLANTSINARELATIVELYSHORTPERIODOFTIMEANDWITHOUTTHENEEDFORHUGEINVESTMENTSITHASTHUSEVOLVEDTOBEANEARTERMALTERNATIVETOREDUCINGTHEENVIRONMENTALIMPACTOFELECTRICITYGENERATIONFROMCOALBIOMASSCOFIRINGOFFERSTHELEASTCOSTAMONGTHESEVERAL

簡介：15PROTEINLABELINGWITHFLASHANDREASHTHOMASMACHLEIDT,MATTROBERS,ANDGEORGETHANSONSUMMARYTHEABILITYTOIMAGEBIOCHEMICALANDPHENOTYPICALCHANGESINLIVINGCELLSHASBECOMECRUCIALFORTHEINVESTIGATIONANDUNDERSTANDINGOFTHEMOLECULARMECHANISMSTHATGOVERNALLPHYSIOLOGICALCELLULARFUNCTIONSINHEALTHANDDISEASEGENETICALLYENCODEDREPORTERSDERIVEDFROMFLUORESCENTPROTEINSFPSHAVEPROVEDTOBEEXTREMELYUSEFULFORLOCALIZATIONANDINTERACTIONSTUDIESINLIVINGCELLSHOWEVER,THELARGESIZEANDSPECTRALPROPERTIESOFFPIMPOSECERTAINLIMITATIONSFORTHEIRUSETHERECENTLYDEVELOPEDFLUORESCEINARSENICALHAIRPINFLASH/TETRACYSTEINEBINDERTECHNOLOGYEMERGEDASAPROMISINGALTERNATIVETOFPFORPROTEINLABELINGANDCELLULARLOCALIZATIONSTUDIESTHECOMBINATIONOFASMALLGENETICALLYENCODEDPEPTIDETAGWITHASMALLMOLECULEDETECTIONREAGENTMAKESTHISTECHNOLOGYPARTICULARLYSUITABLEFORTHEINVESTIGATIONOFBIOCHEMICALCHANGESINLIVINGCELLSTHATAREDIFFICULTTOAPPROACHWITHFLUORESCENTPROTEINSASMOLECULARTAGSWEDESCRIBETHEPRACTICALAPPLICATIONOFTHISTECHNOLOGYTOIMAGEPROTEINDYNAMICSINLIVINGCELLSKEYWORDSBIARSENICALFLASHFLUORESCEINFLUORESCENTPROTEINSGATEWAYHIGHCONTENTSCREENINGLIVECELLIMAGINGLUMIOPROTEINKINASECPROTEINLABELINGREASHRESORUFINTAGTETRACYSTEINE1INTRODUCTIONCURRENTHIGHCONTENTANALYSISISMOSTLYPERFORMEDASENDPOINTANALYSISUSINGIMMUNOFLUORESCENCEASTHEPRIMARYLABELING/DETECTIONMETHODTHISMETHODALTHOUGHVALUABLEBECAUSEOFITSFLEXIBILITYANDEASEOFUSEISBYDEFAULTLIMITEDTOENDPOINTANALYSISTHEABILITYTOPERFORMREALTIMEANALYSISOFPROTEINDYNAMICSINLIVINGCELLSISCRITICALFORTHEINDEPTHUNDERSTANDINGOFTHECOMPLEXBIOCHEMICALANDPHENOTYPICALCHANGESASSOCIATEDWITHCELLBEHAVIORANDFUNCTION1TRADITIONALLY,DETECTIONANDANALYSISOFPROTEINSINLIVINGCELLSRELIEDPRIMARILYONTHEUSEOFFLUORESCENTPROTEINSFPSASGENETICALLYENCODEDTAGS2DESPITEITSPROVENVERSATILITYANDUTILITYFORTHEANALYSISOFPROTEINDYNAMICS,THEREARECERTAINLIMITATIONSFORTHEUSEOFFPSBECAUSEOFTHEIRSIZE28KDFPSHAVETHEPOTENTIALTOINTERFEREWITHTHEACTIVITY,LOCALIZATION,ORCONFORMATIONOFITSFUSIONPARTNERANDCANBEUSUALLYFUSEDONLYTOTHENORCTERMINUSOFAPROTEIN3INADDITION,FPSOFFERONLYLIMITEDSPECTRALVARIETYWITHARELATIVEPAUCITYOFUSEFULREDFPVERSIONS,ALTHOUGHTHEDEVELOPMENTOFIMPROVEDREDFPVARIANTSHASBEENREPORTEDRECENTLY4INRECENTYEARS,ANUMBEROFALTERNATIVELIVECELLLABELINGMETHODSHAVEBEENINTRODUCED,SOLVINGSOMEOFTHEPROBLEMSOFFPSSUCHASTHESPECTRALLIMITATIONS5,6HOWEVER,ALLPUBLISHEDMETHODSRELYONTHEFUSIONOFRATHERSIZABLEPOLYPEPTIDESTOTHEPROTEINOFINTEREST,AND,THEREFORE,SHAREWITHFP,THEDRAWBACKOFPOTENTIALSTERICINTERFERENCEOFTHETAGWITHTHEFUNCTIONOFTHETARGETPROTEIN209FROMMETHODSINMOLECULARBIOLOGY,VOL356HIGHCONTENTSCREENINGAPOWERFULAPPROACHTOSYSTEMSCELLBIOLOGYANDDRUGDISCOVERYEDITEDBYDLTAYLOR,JRHASKINS,ANDKGIULIANO?HUMANAPRESS,INC,TOTOWA,NJTHEREARECURRENTLYNOEXAMPLESFORTHEUSEOFFLASHINHIGHCONTENTSCREENINGHCSAPPLICATIONSPUBLISHEDINTHESCIENTIFICLITERATUREEXISTINGHCSANALYSISINLIVINGCELLSRELIESEXCLUSIVELYONTHEUSEOFFPASTHETAGGING/DETECTIONMETHOD,WITHTHEPREVIOUSLYMENTIONEDLIMITATIONSINHERENTTOTHISAPPROACHTHETC/FLASHLABELINGTECHNOLOGYSHOULDPROVEVALUABLEINCOMPLEMENTINGFPINLIVECELLIMAGINGTHECOMBINATIONOFSMALLTAGSIZEANDTHEHIGHCELLPERMEABILITYANDAFFINITYOFFLASH/REASHPROVIDETHEIDEALMEANSOFPURSUINGCHALLENGINGAPPLICATIONSSUCHASMULTIPLEXIMAGING,FRETBASEDANALYSISOFPROTEINCONFORMATION/INTERACTION10,20,21ANDPULSECHASEEXPERIMENTS14INLIVINGCELLSINTHISREPORTWEATTEMPTTOPROVIDEASYSTEMATICANDPRACTICALINTRODUCTIONTOTHEUSEOFTC/FLASHTECHNOLOGYFORTHELABELINGOFPROTEINSINLIVINGCELLSALTHOUGHSTAININGOFTCTAGGEDPROTEINSINLIVINGCELLSWITHFLASHISARELATIVELYSIMPLEANDSTRAIGHTFORWARDPROCEDURE,THEREADERSHOULDKEEPINMINDTHATNEWAPPLICATIONSUSUALLYREQUIREACERTAINDEGREEOFOPTIMIZATIONANDEMPIRICALTESTINGOFSOMEOFTHEVARIABLESWEDESCRIBETOOBTAINTHEDESIREDRESULTSASPREVIOUSLYMENTIONED,TC/FLASHLABELINGHASBEENSUCCESSFULLYUSEDFORAVARIETYOFSPECIALIZEDIMAGINGANDBIOCHEMICALAPPLICATIONSTABLE1ADETAILEDDESCRIPTIONOFTHESEAPPLICATIONSWOULDEXCEEDTHESCOPEOFTHISREPORTTHEREADERISINSTEADREFERREDTOTHELITERATUREFORFURTHERINFORMATION2MATERIALS21GENERATIONANDEXPRESSIONOFTCTAGGEDFUSIONPROTEINS1TCTAGGINGEXPRESSIONVECTOREG,PCDNA62?/LUMIODEST,INVITROGEN,WWWINVITROGENCOM2REAGENTSANDEQUIPMENTFORSTANDARDMOLECULARBIOLOGYTECHNIQUES3ESCHERICHIACOLITOP10?INVITROGEN4CHOK1CELLLINEORANYOTHERCELLLINESUITABLEFORLIVECELLANALYSISBYMICROSCOPY5STANDARDCELLCULTUREREAGENTSANDEQUIPMENTREQUIREDFORTHECULTIVATIONOFMAMMALIANCELLSPLASTICWARECORNING,WWWCORNINGCOM\LIFESCIENES\,ALLMEDIA/SUPPLEMENTSINVITROGENGIBCOPROTEINLABELINGWITHFLASHANDREASH211TABLE1PUBLISHEDFLASHAPPLICATIONSMETHODPROTEINOFINTERESTCELLSYSTEMREFERENCEFLUORESCENCEASSISTEDSYNAPTOTAGMINCONNEXIN43DROSOPHILA,THIRD9,11LIGHTINACTIVATIONINSTARLARVAEFRETA2AADENOSINERECEPTORCHO10CONFORMATIONALANALYSIS–CALMODULINHEK29312,13,26ENVIRONMENTSENSITIVEPROBEELECTRONMICROSCOPYCONNEXIN43HELA14,15SINGLEMOLECULECALMODULINNA16DETECTION/ANALYSISAFFINITYPURIFICATIONKINESINNA17PROTEINTRANSLOCATION/TRACKINGCONNEXIN43HELA14,15HIVHELA,JURKAT18GLUCOCORTICOIDRECEPTORHELA,CHOFIG3APKCΑHELA,CHOFIG3BΒTUBULINHELA,CHOFIG3CΒTUBULINSACCHAROMYCES2CYTOCHROMECCEREVISAE19MULTICOLORPULSECHASEANALYSISCONNEXIN4314OLIGOMERIZATION/AGGREGATIONEBOLAVIRUSPROTEIN40293T20ANALYSISCRABPIESCHERICHIACOLI21–23PHOSPHOLAMBANINVITRO24ELECTROPHORESISNA25CRABP,CELLULARRETINOICACIDBINDINGPROTEIN