簇毛麥6V染色體短臂結(jié)構(gòu)變異體庫的構(gòu)建.pdf

1、簇毛麥(Haynaldia villosa L.2n=14，VV)是一年生異花授粉草本植物，原產(chǎn)于地中海沿岸和高加索地區(qū)，是小麥的野生近緣物種，對(duì)白粉病、銹病、眼斑病及梭條花葉病等多種病害都具有抗性，同時(shí)還有密穗多花、抗寒、耐旱、籽粒的蛋白質(zhì)含量高等特性，培育小麥—簇毛麥屬間染色體小片段易位，有助于更好地在小麥遺傳改良中利用簇毛麥的有益基因。為了更精確地定位抗白粉病基因Pm21，創(chuàng)造更多涉及6VS不同區(qū)段的結(jié)構(gòu)變異體，創(chuàng)制片段更小的抗白

2、粉病易位系，本研究選擇以6VS/6AL易位系92R137的雌配子為輻射材料，利用分子細(xì)胞學(xué)方法對(duì)輻射后代進(jìn)行鑒定，篩選涉及簇毛麥6V染色體短臂不同區(qū)段的結(jié)構(gòu)變異體。在輻射后代中，通過根尖細(xì)胞有絲分裂中期染色體基因組原位雜交(GISH)技術(shù)的鑒定，共檢測(cè)到51株涉及簇毛麥6V染色體短臂的結(jié)構(gòu)變異體，包括19個(gè)中間插入易位，20個(gè)頂端易位，8個(gè)缺失，4株其他結(jié)構(gòu)變異類型。
　　 經(jīng)比較遺傳作圖分析，小麥第6部分同源群染色體與水稻2號(hào)

3、染色體呈線性關(guān)系。通過比較基因組學(xué)設(shè)計(jì)引物95對(duì)，用中國春、簇毛麥、92R137、硬簇麥、De1.6VS-1和De1.6VS-2對(duì)這些引物進(jìn)行篩選、定位。在6VS上發(fā)現(xiàn)12個(gè)特異性分子標(biāo)記，加上前人在6VS上開發(fā)的8個(gè)特異性分子標(biāo)記，在6VS上共得到20個(gè)特異性分子標(biāo)記。用這些特異性分子標(biāo)記，對(duì)結(jié)構(gòu)變異體所涉及的簇毛麥6VS的變異區(qū)段進(jìn)行鑒定，其中31個(gè)結(jié)構(gòu)變異材料已經(jīng)確定其外源片段的大小及斷點(diǎn)位置，覆蓋了簇毛麥6VS的不同區(qū)段，這些結(jié)

4、構(gòu)變異體是構(gòu)建“簇毛麥6V染色體短臂結(jié)構(gòu)變異體庫”和進(jìn)行物理作圖的重要材料。利用所獲得的6VS結(jié)構(gòu)變異體并結(jié)合白粉病抗性鑒定，將抗白粉病基因Pm21定位在6VS上FL值為0.45-0.58的染色體區(qū)段上。
　　 經(jīng)基因組原位雜交(GISH)技術(shù)鑒定，獲得了27個(gè)純合的結(jié)構(gòu)變異體，利用三種重復(fù)序列(pAs1、pSc119.2、676D4)做探針的原位雜交技術(shù)對(duì)結(jié)構(gòu)變異染色體的小麥染色體區(qū)段進(jìn)行鑒定，其中13個(gè)純合材料能初步判斷其小