四氧化三鐵磁性復(fù)合微球的制備及其在全血基因組DNA自動(dòng)化提取中的應(yīng)用.pdf

1、與傳統(tǒng)的核酸純化方法相比，以Fe3O4磁性復(fù)合微球?yàn)檩d體的核酸純化方法由于其純化過(guò)程不需要離心，避免了交叉污染，提取結(jié)果重復(fù)性好、穩(wěn)定性高、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)而成為一種非常有前景的純化方法，目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用于大規(guī)模自動(dòng)化生物分離的磁性微粒產(chǎn)品仍較少。
　　 本研究旨在利用水熱合成的方法制備四氧化三鐵磁性微粒，并將二氧化硅修飾在磁性微粒表面形成磁性復(fù)合微球，使其具有良好的磁響應(yīng)性和化學(xué)穩(wěn)定性，并將磁性復(fù)合微球應(yīng)用于全血基因組DNA純化，建

2、立了快速、高效、高質(zhì)量的核酸自動(dòng)化純化體系。主要得到了以下結(jié)論：
　　 (1)利用水熱合成的方法制備了Fe3O4磁性微粒，并以X射線衍射(XRD)、透射電子顯微鏡鏡(TEM)、掃描電子顯微鏡(SEM)、傅立葉紅外光譜(FT-IR)、振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)(VSM)等分析技術(shù)對(duì)Fe3O4粒子的物相、微觀形貌和磁學(xué)性能進(jìn)行了表征，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，制備的Fe3O4磁性粒子粒度大小在200 nm-300 nm范圍內(nèi)，粒徑分布均一、大小可控、分散性

3、好，平均飽和磁化強(qiáng)度為72.6 emu/g，室溫下接近于超順磁性。
　　 (2)利用TEOS水解將二氧化硅包覆在Fe3O4磁粒上，制備了具有良好磁響應(yīng)性和化學(xué)穩(wěn)定性的SiO2@Fe3O4磁性復(fù)合微球。并利用XRD、TEM、FT-IR、VSM等分析技術(shù)對(duì)復(fù)合微球進(jìn)行了表征，其結(jié)果表明：復(fù)合粒子表面均勻包覆了無(wú)定型SiO2殼層，其結(jié)構(gòu)為核殼結(jié)構(gòu)，復(fù)合微球的平均飽和磁化強(qiáng)度為68.8 emu/g。
　　 (3)SiO2磁性復(fù)合

4、微球在全血基因組DNA純化上的應(yīng)用：利用本實(shí)驗(yàn)室已建立的核酸純化試劑體系，以制備的SiO2磁性復(fù)合微球?yàn)檩d體，提取全血基因組DNA。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后的DNA純化體系，換算成每毫升新鮮血液提取的基因組DNA的量平均為29.8μg，經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示DNA的片段大小在22 Kb左右，電泳中所有DNA均呈均一條帶，未發(fā)生降解，且純度較高。將優(yōu)化的體系與開(kāi)放式的核酸自動(dòng)化提取工作站相結(jié)合，并對(duì)自動(dòng)化提取過(guò)程進(jìn)行了優(yōu)化，