ⅡA分泌型磷脂酶A2與銀屑病皮損關(guān)系的研究.pdf

1、研究目的：從組織學(xué)和分子生物學(xué)角度探討sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損組織中表達(dá)，揭示其與銀屑病發(fā)病的相互關(guān)系，以證實(shí)sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損發(fā)病中的作用，為銀屑病臨床早期診斷和治療提供依據(jù)和指導(dǎo)。
　　研究?jī)?nèi)容：通過(guò)免疫組化方法，檢測(cè)sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損組織中的表達(dá)；通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)血清中sPLA2-ⅡA的含量；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）的方法檢測(cè)sPLA2-ⅡA mRNA表達(dá)水平，從這幾個(gè)方面共同

2、闡明sPLA2-ⅡA表達(dá)水平與銀屑病發(fā)病的關(guān)系，具體內(nèi)容如下：
　　1．通過(guò)皮損面積和皮損嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI評(píng)分）來(lái)分析兩者之間的關(guān)系，調(diào)查了解相關(guān)病例臨床信息（例如遺傳史、過(guò)敏史等）。
　　2．采用免疫組織化學(xué)方法，對(duì)銀屑病患者軀干或四肢部位的皮損進(jìn)行sPLA2-ⅡA指標(biāo)評(píng)價(jià)。
　　3．應(yīng)用PASI評(píng)分分析銀屑病患者組織中sPLA2-ⅡA表達(dá)水平與銀屑病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。同時(shí)對(duì)研究對(duì)象外周血sPLA2-ⅡA含量進(jìn)

3、行檢測(cè)。
　　4．采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法，檢測(cè)研究對(duì)象皮膚組織中sPLA2-ⅡA mRNA的表達(dá)水平。
　　方法：銀屑病皮損標(biāo)本是從患者軀干或四肢的典型皮損處采取，非銀屑病對(duì)照組標(biāo)本是從其軀干或四肢部位的正常皮膚采取（從外科及骨科手術(shù)中獲得），標(biāo)本部分留取以制備蠟塊切片，余下部分液氮凍存以備提取總RNA待進(jìn)行相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)；采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)銀屑病皮損樣本和對(duì)照組樣本 sPLA2-ⅡA表達(dá)水平；

4、采用酶聯(lián)免疫吸附方法從血清學(xué)水平檢測(cè)研究對(duì)象外周血sPLA2-ⅡA的含量變化；應(yīng)用常規(guī)RT-PCR方法，從mRNA水平檢測(cè)研究對(duì)象皮膚組織中sPLA2-ⅡA的表達(dá)情況。從組織學(xué)、血清學(xué)以及分子生物學(xué)三個(gè)角度共同揭示sPLA2-ⅡA的表達(dá)變化與銀屑病皮損發(fā)病的相互關(guān)系，為進(jìn)一步預(yù)防、治療銀屑病提供理論依據(jù)。
　　結(jié)果：皮損嚴(yán)重程度和 PA S I評(píng)分呈正相關(guān)；免疫組織化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損組織中的表達(dá)顯著高于軀干或

5、四肢部位的正常皮膚，即對(duì)照組的皮膚組織；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損患者的血清中 sPLA2-ⅡA含量明顯高于對(duì)照組；RT-PCR檢測(cè)銀屑病皮損組和對(duì)照組sPLA2-ⅡA的mRNA表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)皮損組明顯高于對(duì)照組sPLA2-ⅡA水平，以上結(jié)果均提示sPLA2-ⅡA是銀屑病發(fā)病的重要特異性靶分子，sPLA2-ⅡA有可能對(duì)銀屑病的分子診斷有幫助，未來(lái)會(huì)成為靶向治療的新靶標(biāo)。
　　結(jié)論：本研究通過(guò)免疫組化染色發(fā)現(xiàn) sPLA2-

6、IIA在真皮層中高表達(dá)，真皮乳頭血管周圍細(xì)胞漿中可見(jiàn)棕黃色顆粒，這一點(diǎn)與許多國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)論相符，通過(guò)免疫組化方法還發(fā)現(xiàn)在銀屑病表皮上層中 sPLA2-IIA表達(dá)升高顯著，這一點(diǎn)類似于分化異常的角質(zhì)化細(xì)胞。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損患者的血清中sPLA2-ⅡA含量明顯高于對(duì)照組。采用RT-PCR方法檢測(cè)到銀屑病皮損組sPLA2-IIA的mRNA表達(dá)水平明顯增高，這一結(jié)果提示銀屑病患者可能在基因轉(zhuǎn)錄水平上激活了sPLA2-IIA