藍(lán)藻藻藍(lán)膽素及其蛋白質(zhì)的生物工程鑒定.pdf

1、藻膽蛋白是藍(lán)藻中的捕光蛋白，其生物合成的重要一步是藻膽色素與脫輔基蛋白的連接。大多數(shù)藻膽色素的正確連接都需要結(jié)合位點(diǎn)專一和對(duì)色素的構(gòu)象有選擇性的裂合酶來催化完成,但是這方面的報(bào)道不是很多。本實(shí)驗(yàn)室通過同源性分析獲得的由編號(hào)為alr0617基因編碼的蛋白為b-CPC、b-PEC中的Cys-84，a-APC和b-APC中的Cys-82與PCB的連接的催化酶，命名為藻藍(lán)蛋白裂合酶CpeS。 設(shè)計(jì)引物通過PCR技術(shù)從藻總DNA中擴(kuò)增藻

2、藍(lán)蛋白b亞基基因cpcB,其編碼的蛋白CpcB在CpeS催化下與PCB進(jìn)行體外重組，找到CpcB的最佳表達(dá)條件：溫度 35°C，時(shí)間 6h,LB培養(yǎng)基。 CpeS存在的情況下，通過體內(nèi)重組方式得到色素蛋白PCB-b-CPC和PCB-b-PEC，但是卻得不到色素蛋白PCB-b-PEC（C84S）；沒有CpeS存在的情況下，只有11.8％的PCB-b-CPC和6％的PCB-b-PEC生成。這些結(jié)果表明：藻藍(lán)蛋白裂合酶起到了催化PC

3、B與Cys-84連接的作用。 構(gòu)建CpeS（H22V）突變體，通過體內(nèi)重組的方式研究了組氨酸殘基突變對(duì)CpeS酶活性的影響，結(jié)果表明該殘基對(duì)于CpeS的酶活性具有一定的影響,其活性為野生型CpeS酶活性的14.5％。使用胃蛋白酶對(duì)天然色素蛋白b-CPC、b-PEC和APC以及重組色素蛋白PCB-CpcB(C155I)、PCB-PecB（C155I）、PCB-a-APC和PCB-b-APC進(jìn)行相同條件的水解并得到各自的色素肽。酸