青藏高原棘球?qū)俳{蟲(chóng)基因多態(tài)性研究.pdf

1、【目的】:本研究擬以青藏高原棘球蚴病和棘球?qū)俳{蟲(chóng)為研究對(duì)象，運(yùn)用線粒體細(xì)胞色素 C氧化酶亞單位Ⅰ基因（COX1）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（脫氫酶亞單位Ⅰ基因（NAD1））對(duì)收集的青藏高原包蟲(chóng)病患者感染的棘球?qū)俳{蟲(chóng)進(jìn)行基因多態(tài)性研究，明確檢測(cè)到棘球?qū)俳{蟲(chóng)的基因型及其株內(nèi)遺傳變異，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，掌握青藏高原流行的棘球?qū)俳{蟲(chóng)種類數(shù)目及基因序列多態(tài)性，指導(dǎo)臨床診斷和治療，為棘球蚴病的預(yù)防控制提供理論上的指導(dǎo)。
　　【方法】:對(duì)收集的172

2、例棘球蚴病患者的包囊，分離純化包囊，提取DNA，選擇線粒體 DNA的 COX1基因、NAD1基因，設(shè)計(jì)特異性引物， PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物測(cè)序，通過(guò)生物信息學(xué)軟件，分析青藏高原棘球?qū)俳{蟲(chóng)的流行株基因型及基因的多態(tài)性，利用各個(gè)基因構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，研究棘球?qū)俳{蟲(chóng)的基因序列多樣性和遺傳進(jìn)化特征。
　　【結(jié)果】:本論文得到的研究結(jié)果如下：
　　通過(guò)分子生物學(xué)方法鑒定所分離出的包囊，均為 G1型，表明青藏高原棘球?qū)俳{蟲(chóng)流行株為細(xì)粒棘球

3、絳蟲(chóng)（ G1型）。所測(cè)定的 G1型棘球蚴絳蟲(chóng) COX1基因序列和 NAD1基因序列長(zhǎng)度分別為1674bp和894bp。通過(guò)對(duì)分離株標(biāo)本提取 DNA并擴(kuò)增 NAD1和 COX1基因序列分析，發(fā)現(xiàn)青藏高原主要棘球?qū)俳{蟲(chóng)的優(yōu)勢(shì)株為 G1型，NAD1基因存在14個(gè)各不同的序列，20個(gè)突變位點(diǎn)，占分析位點(diǎn)數(shù)的2.2％，COX1基因存在18個(gè)各不同的序列，45個(gè)突變位點(diǎn)，占分析位點(diǎn)數(shù)的2.8%。堿基的變化為轉(zhuǎn)換和顛換，且轉(zhuǎn)換明顯多于顛換。在對(duì)172

4、例分離株成功擴(kuò)增的基因序列分析中發(fā)現(xiàn)基因序列沒(méi)有明顯差異。通過(guò)對(duì)擴(kuò)增出的136條基因序列進(jìn)行同源性分析，均與Genbank中檢索到的普通羊株（AF297617）NAD1基因序列同源性達(dá)98.88%以上，COX1基因序列同源性達(dá)99.82%以上。對(duì)青藏高原各個(gè) G1型棘球?qū)俳{蟲(chóng)分離株NAD1和COX1基因單倍型分析，核苷酸序列差異較小。136株G1型細(xì)粒棘球蚴共有14個(gè)不同的基因型單倍型。NAD1基因的核苷酸序列在117位點(diǎn)發(fā)生了T與C置

5、換，COX1基因的核苷酸序列在426、429、456位點(diǎn)發(fā)生了T與C置換，是流行于青藏高原最主要的G1型細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)單倍體。
　　【結(jié)論】:青藏高原主要棘球?qū)俳{蟲(chóng)的優(yōu)勢(shì)株為細(xì)粒棘球絳蟲(chóng) G1型，且 COX1基因相對(duì)于 NAD1基因有較為豐富的單倍型多態(tài)性。COX1基因和NAD1基因證實(shí)青藏高原G1型棘球?qū)俳{蟲(chóng)核苷酸序列相互間差異較小。上述研究結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)展棘球?qū)俳{蟲(chóng)分子流行病學(xué)調(diào)查積累了數(shù)據(jù)，也為青藏高原包蟲(chóng)病的防治提供了參考。