人瘢痕疙瘩成纖維樣(間充質(zhì))干細胞生物學特性鑒定.pdf

1、目的:探討人體瘢痕疙瘩(keloid,KD)中是否存在多能間充質(zhì)干細胞(MSCs),并對其進行分離培養(yǎng)及初步研究其生物學特性。
　　 方法:采用兩步酶消化法從人的瘢痕疙瘩中分離培養(yǎng)瘢痕疙瘩來源間充質(zhì)干細胞(keloid-derivedmesenchymalstemcell,KMSCs),觀察其貼壁、增殖等生物學特性;應用流式細胞技術(FCM)檢測培養(yǎng)細胞的表面標志CD29、CD34、CD44、CD45及CD90的表達以及檢測細胞

2、周期;通過免疫細胞化學法檢測該細胞CK19、Oct4、波形蛋白的表達情況;逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(realtimepolymerasechainreaction,RT-PCR)檢測細胞Oct4mRNA的表達情況;實驗同時對該細胞進行成骨細胞、成軟骨細胞以及成脂細胞多向誘導分化能力鑒定。
　　 結果:從人的瘢痕疙瘩中分離出間充質(zhì)樣干細胞,原代細胞形態(tài)多為長梭形或多角形,呈放射狀集落樣生長,體外培養(yǎng)連續(xù)傳代后,形態(tài)較為均一,排列不規(guī)則,

3、以梭形為主;細胞生長曲線顯示細胞開始1-2天生長較慢,從第三天左右細胞生長增快,到第8天左右生長進入平臺期;細胞周期顯示細胞群中有65.18±3.96％的細胞處于G0/G1期,S期的細胞占6.92±1.82％,G2/M的細胞占27.90±2.19％;流式細胞儀檢測細胞表型分析表明,該細胞均高表達CD29、CD44、CD90等間充質(zhì)干細胞表面標志、不表達CD34、CD45等造血干細胞表面標志,且原代及P3代細胞無明顯變化;RT-PCR法檢