免疫淀粉微球的制備.pdf

1、肝特異性脂蛋白(livcr specific lipoprotein，LSP)在乙型肝炎免疫發(fā)病機(jī)理中起一定作用，是肝損傷的主要靶抗原。本文將肝特異性脂蛋白抗體(LSP抗體)與淀粉微球交聯(lián)，制備了免疫淀粉微球，通過(guò)LSP抗體與抗原LSP的特異性反應(yīng)使免疫淀粉微球具有了主動(dòng)靶向肝臟的功能，保護(hù)肝細(xì)胞，減少乙肝患者肝損傷，淀粉微球還可載藥使藥物選擇性濃集于病變部位，而不分布或少分布在正常部位，為探索治療乙型肝炎的新方法提供參考。 本

2、研究采用蔗糖密度梯度離心法從小鼠新鮮肝臟中提取LSP，以LSP為抗原免疫新西蘭大白兔，制備LSP抗體。以可溶性淀粉為原料，采用反相微乳法合成淀粉微球，利用環(huán)氧氯丙烷活化淀粉微球，將LSP抗體與活化的淀粉微球交聯(lián)，得到免疫淀粉微球。 小鼠肝臟冰凍切片的直接熒光抗體染色實(shí)驗(yàn)鑒定了所制備的LSP抗體具有特異性。 以環(huán)氧密度(epoxy density,EPD)為指標(biāo)，考察了活化過(guò)程中的影響因素，研究得出： 1.反應(yīng)初期

3、，活化淀粉微球上環(huán)氧密度隨著時(shí)間的增加和溫度的升高而增大；反應(yīng)進(jìn)行到一定時(shí)間后，活化淀粉微球上環(huán)氧密度開始降低，尤其是反應(yīng)溫度較高時(shí)，這種降低的趨勢(shì)更為明顯。在30℃下反應(yīng)5h，可獲得最高環(huán)氧密度。 2.活化淀粉微球的環(huán)氧密度隨著反應(yīng)體系中氫氧化鈉濃度的增大先增大后減小，當(dāng)氫氧化鈉的濃度為2mol/L時(shí)，環(huán)氧密度最大。 3.在一定范圍內(nèi)，反應(yīng)體系中環(huán)氧氯丙烷的加入量越多，活化淀粉微球的環(huán)氧密度越高，當(dāng)環(huán)氧氯丙烷用量為0.

4、35mL/g淀粉微球時(shí)，環(huán)氧密度達(dá)到最大，繼續(xù)增加環(huán)氧氯丙烷的用量環(huán)氧密度也不會(huì)繼續(xù)增加。 通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化了LSP抗體與活化淀粉微球交聯(lián)的條件，適宜交聯(lián)的緩沖液pH范圍為9.4-9.7，交聯(lián)反應(yīng)的合適時(shí)間為17-20h。在優(yōu)化條件下，活化淀粉微球與LSP抗體交聯(lián)，經(jīng)測(cè)定單位淀粉微球交聯(lián)LSP抗體的量為7.7mg/g。 免疫淀粉微球?qū)乖璍SP的結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明：?jiǎn)挝幻庖叩矸畚⑶驅(qū)乖璍SP的結(jié)合量為0.5mg/g，說(shuō)明