SM22α抑制球囊損傷誘導的新生內膜形成.pdf

1、目的：經皮腔內冠狀動脈成形術（percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA）是目前治療冠心病的安全、有效方法之一，但其遠期效果受到局部血管再狹窄（restenosis，RS）的影響。
　　 平滑肌22 alpha（smooth muscle22 alpha，SM22α）是血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）的一種分化標志物，

2、其表達具有平滑肌組織特異性和細胞表型特異性。為了探討SM22α與血管內膜增生的關系，本實驗利用本室構建的SM22α腺病毒載體表達系統(tǒng)，將其導入內膜剝脫的頸總動脈壁，觀察其在血管壁中的表達，以及對球囊損傷誘導的血管內膜增生的影響，揭示SM22α抑制內膜增生的分子機制。
　　 方法：
　　 1頸總動脈球囊損傷動物模型的復制及分組
　　 將SD大鼠（250～300 g）常規(guī)麻醉消毒，沿頸部正中線切口，分離暴露左側頸總動

3、脈與頸外動脈，在頸外動脈遠心端剪一楔形切口，球囊導管自切口插入至主動脈分支處，充盈球囊后將其拖回至頸外動脈切口處，如此反復三次，球囊減壓后退出。夾閉頸總動脈近心端，由切口處注入20μlpAd-SM22α溶液，結扎頸外動脈，關閉切口。20 min后打開近心端血管夾，恢復血流。
　　 實驗動物分為三組，uninfected組、pAd組和pAd-SM22α組。
　　 2標本的處理
　　 術后從股動脈放血處死大鼠。取大鼠

4、頸總動脈并將血管分為兩部分，一部分勻漿，提取組織蛋白，用Western blot方法檢測血管壁中SM22α、p-Raf-1、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表達變化。另一部分做病理切片，HE染色觀察血管內膜增生情況并進行形態(tài)測量學分析，其余切片行免疫組織化學染色，觀察SM22α、PCNA和p27在血管壁中的表達情況。
　　 結果：
　　 1外源性SM22α在血管壁中的表達
　　 Western blot結果顯

5、示，pAd-SM22α組中SM22α的表達水平明顯高于uninfected組和pAd組。同時，免疫組織化學染色亦顯示，在pAd-SM22α轉染組血管壁中，SM22α的表達量明顯增加，陽性染色細胞數量及著色強度較其余兩組明顯增強，與Western blot結果一致。
　　 2過表達SM22α抑制球囊損傷誘導的血管內膜增生
　　 形態(tài)學分析顯示，球囊損傷14天后，uninfected組與pAd組中膜內的VSMC排列紊亂，內膜

6、呈彌散性增厚，管腔縮小，內膜/中膜（intima/media，I/M）比值分別為2.43±0.21和2.19±0.19，兩組之間無明顯差異。而pAd-SM22α組血管內膜的增生程度和I/M比值（0.68±0.12）明顯小于uninfected組和pAd組（P<0.05）。以上結果表明，SM22α過表達可以明顯抑制球囊損傷誘導的血管內膜增生。
　　 3 SM22α過表達抑制血管壁PCNA的表達，促進p27的表達
　　 免疫

7、組化結果顯示，球囊損傷14天時，在uninfected組與pAd組中，PCNA陽性染色的細胞數量及單細胞染色強度均較高并且主要分布在新生內膜層；在pad-SM22α組中，PCNA在血管壁中陽性棕色顆粒數量較少、顏色較淺。而p27的表達與之相反，在uninfected組與pAd組血管壁中，陽性著色較淺；在pAd-SM22α組中的表達則是明顯增高。上述結果提示，SM22α過表達抑制球囊損傷后血管壁中PCNA的表達，促進p27的表達。

8、　　 4 SM22α過表達可抑制球囊損傷誘導的Raf-1、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化活化
　　 Western blot結果顯示，與uninfected組和pAd組相比較，pAd-SM22α組中Raf-1、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化水平顯著下降，SM22α對ERK/MAPK途徑具有較強的抑制作用，而uninfected組與pAd組相比，上述三種蛋白磷酸化水平無顯著差異。結果提示，SM22α過表達抑制Raf-1、

9、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化活化。
　　 結論：
　　 1成功建立頸總動脈腔內感染pAd-SM22α腺病毒載體的模型。
　　 2 SM22α過表達顯著抑制內皮剝脫誘導的血管內膜增生。
　　 3外源性SM22α可下調增殖相關基因PCNA表達和上調細胞周期抑制因子p27表達。
　　 4 SM22α過表達可抑制球囊損傷誘導的Raf-1、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化活化，通過阻斷Raf-1-M