檢測兩型鴨圓環(huán)病毒雙重PCR方法的建立和分子流行病學調(diào)查.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鴨圓環(huán)病毒(Duck circovirus,DuCV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus),基因組為單股共價閉合環(huán)狀DNA,整個基因組大小約為2kb。鴨圓環(huán)病毒主要侵害病鴨的胸腺、法氏囊等免疫器官。鴨感染DuCV后表現(xiàn)為生長發(fā)育障礙、生長停滯,在出殼幾周內(nèi)發(fā)病,生長停滯和羽毛形狀失常。近年來實驗室建立了檢測鴨圓環(huán)病毒的PCR方法和ELISA方法,但至今沒有快速對鴨圓環(huán)病毒的分型檢測方法。本實驗利用

2、兩型鴨圓環(huán)病毒Cap蛋白基因序列的特異性對兩型鴨圓環(huán)病毒分型。
  本研究主要進行了如下工作:
  1.檢測兩種基因型鴨圓環(huán)病毒雙重PCR方法的建立
  DuCV存在兩個基因型,兩型DuCV的Cap基因核酸序列同源性在78%左右,二者之間的Cap蛋白序列的同源性只有77.6%左右,抗原表位預(yù)測分析表明二者之間也存在較大差異。而根據(jù)DuCV基因組同源性分型結(jié)果和Cap蛋白序列的分型結(jié)果基本一致,因此,我們選擇Cap蛋白對

3、DuCV進行分型鑒定。通過對從Genbank上下載的56個DuCV序列進行同源性分析,結(jié)合兩個基因型DuCV Cap基因比對結(jié)果,設(shè)計了四條特異性引物,并對PCR反應(yīng)條件進行了優(yōu)化,建立了雙重PCR檢測方法。研究結(jié)果表明,該方法特異性強,能夠?qū)尚虳uCV進行分型檢測,且不受組織DNA和其他病原的影響;靈敏度高,最多能夠檢測到10個拷貝的鴨圓環(huán)病毒DNA,能夠用于DuCV的分型檢測和分子流行病學調(diào)查。
  2.利用雙重PCR方法對

4、山東地區(qū)養(yǎng)鴨場進行流行病學檢測
  我們在不同時間采集了濰坊地區(qū)的8個鴨群共120只(每個鴨群15只)齡病死弱雛,采集其肝臟、胸腺、脾臟、法氏囊、腎臟、心臟等器官進行DuCV檢測。使用建立的雙重PCR檢測方法進行分子流行病學檢測,檢測結(jié)果表明:3個鴨群(37.5%)檢出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,3個鴨群(37.5%)檢出DuCV-2的單獨感染。15只雛鴨被檢出感染DuCV,其中3.33%(4/120)的雛鴨檢出DuCV

5、-1和DuCV-2的混合感染,9.17%(11/120)的雛鴨只感染DuCV-1或DuCV-2。采集泰安地區(qū)8個鴨群共120只雛鴨(每個鴨群15只)以同樣的方法進行流行病學檢測,沒有檢出DuCV感染。試驗結(jié)果表明山東省老養(yǎng)殖區(qū)鴨群中存在較為嚴重的DuCV-1和DuCV-2混合感染的現(xiàn)象。
  3.對鴨圓環(huán)病毒是否垂直傳播的初步探究
  王鑫等于2012年對濰坊地區(qū)鴨場進行DuCV檢測,發(fā)現(xiàn)鴨場DuCV-1陽性率為27.32%

6、,DuCV-2陽性率為42.81%。我們對DuCV感染陽性的某種鴨場中進行了跟蹤檢測,共收集了80枚未孵化的種蛋、30只孵化過程中出現(xiàn)的死胚和120只剛出殼的雛鴨作為檢測對象,用本研究建立的多重PCR檢測方法進行分子流行病學檢測。種蛋中DuCV-2單獨感染陽性率為2.50%,兩型DuCV混合感染率為1.25%,沒有檢測到DuCV-1單獨感染;死胚中DuCV-1單獨感染率為3.33%,DuCV-2單獨感染率為6.67%,兩型DuCV混合感

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