高鹽誘導(dǎo)蝦夷扇貝(Patinopecten yessoensis)三倍體的研究.pdf

1、本研究對蝦夷扇貝的受精發(fā)育及一種新的三倍體誘導(dǎo)方法——高鹽誘導(dǎo),進行了相關(guān)探討分析。研究使用高鹽處理的方法以抑制蝦夷扇貝受精卵極體的釋放,成功獲得三倍體蝦夷扇貝。同時,研究對以高鹽方法誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體的誘導(dǎo)參數(shù)和蝦夷扇貝受精發(fā)育過程、三倍體幼蟲生長發(fā)育和存活等情況進行了分析,為蝦夷扇貝三倍體育種工作提供了理論和實踐依據(jù),也為貝類多倍體育種研究提出了新的研究方向和思路。
　　研究主要分為以下三個部分:
　　1、蝦夷扇貝的受精

2、細胞學(xué)觀察
　　研究采用二氨基苯基吲哚(DAPI)染色法,對蝦夷扇貝的受精細胞學(xué)過程進行了熒光顯微觀察。觀察結(jié)果顯示:未受精的成熟卵子外形上近圓球形,核相大多位于第一次減數(shù)分裂中期;精子呈圓形亮點狀,隨機入卵。精子入卵后體積膨大成球形,刺激啟動成熟卵母細胞的減數(shù)分裂,釋放出極體。卵母細胞的第二次減數(shù)分裂完成后,精核解凝、泡狀化,體積膨脹,形成雄原核;卵子染色質(zhì)去濃縮,擴散膨大,形成雌原核。成熟的雌雄原核完成融合過程,最終形成二倍體

3、的合子。蝦夷扇貝受精卵發(fā)育過程具明顯的不同步現(xiàn)象。
　　2、高鹽誘導(dǎo)蝦夷扇貝三倍體最佳誘導(dǎo)參數(shù)的探討
　　采用高鹽方法,在不同的處理持續(xù)時間(15min,20min,25min、30min、35min)、不同處理時機(出現(xiàn)第一個第一極體、第一極體出現(xiàn)比例達30％、第一極體出現(xiàn)比例達50%、出現(xiàn)第一個第二極體和第二極體出現(xiàn)比例達20%時)和不同高鹽誘導(dǎo)鹽度(S=35、40、45、50、55、60、65、70)下,分別抑制蝦夷扇

4、貝受精卵極體的釋放以獲得蝦夷扇貝三倍體,并綜合結(jié)果,指出最佳的誘導(dǎo)參數(shù)。結(jié)果顯示:高鹽處理液鹽度達 S=60,且在第一個第二極體出現(xiàn)時開始處理,持續(xù)處理20min,得到的誘導(dǎo)結(jié)果最佳,誘導(dǎo)率最高可達72.12%。
　　3、蝦夷扇貝三倍體幼蟲培養(yǎng)
　　采用高鹽誘導(dǎo)的方法,采用最佳誘導(dǎo)參數(shù)進行蝦夷扇貝三倍體誘導(dǎo)工作,對獲得的扇貝幼蟲進行培育,并分析其生長、存活情況。結(jié)果顯示:以高鹽鹽度S=60,在第一個第二極體出現(xiàn)時開始處理受精