乙肝丙肝PBMC中ZIP2和ZIP8的表達及HBV對THP-1中ZIP2和ZIP8表達的影響.pdf

1、研究背景:
　　鋅是生物體所必須的微量元素之一，是機體多種酶的必需組分或激活因子，與機體發(fā)育、骨骼生長、免疫功能、內分泌調節(jié)、蛋白質和核酸代謝等一系列生理活動密切相關。鋅缺乏可以造成多系統(tǒng)的損害，鋅離子代謝的穩(wěn)態(tài)平衡對維持機體正常生理功能至關重要。隨著分子生物學技術的不斷發(fā)展，近年來已發(fā)現(xiàn)哺乳動物中存在兩個重要鋅轉運蛋白家族直接參與細胞內鋅離子的穩(wěn)態(tài)代謝，即SLC39A(solute-linked carrier39A，SLC39

2、A)和SLC30A(solute-linkedcarrier30A，SLC30A)兩大家族。SLC39A基因家族也被命名為ZIP(ZRT,IRT-like protein，ZIP)家族。而SLC30A基因家族又被稱ZnT(zinc transporter1，ZnT)家族。SLC39A和SLC30A兩個轉運蛋白家族分別參與了鋅離子轉進和轉出細胞的運輸過程。兩大家族鋅轉運蛋白在各種亞細胞器、細胞及器官中的分布不同，具有一定的組織特異性。越來

3、越多的證據(jù)表明SLC39A和SLC30A兩大家族不僅直接參與了細胞的鋅離子穩(wěn)態(tài)代謝，同時還通過復雜的機制參與腫瘤和糖尿病等疾病的發(fā)生和發(fā)展，它們逐漸成為鋅營養(yǎng)和代謝疾病的研究熱點。
　　人類ZIP2是首先被報道的哺乳動物SLC39A家族成員。hZIP2組織表達較低且局限，僅在前列腺、子宮、子宮頸上皮、視神經(jīng)及單核細胞中表達。而用鋅螯合劑TPEN處理人THP-1單核細胞系或人外周血單核細胞造成缺鋅細胞模型，發(fā)現(xiàn)其hZIP2 mRNA

4、表達明顯增加，提示人hZIP2轉錄表達受鋅離子調控。ZIP8與炎癥免疫關系密切。ZIP8表達下降可降低胞內鋅含量，損害線粒體功能，從而引起細胞大量死亡。另外，ZIP8在人類T細胞中表達較高，當有外界刺激時， T細胞中ZIP8表達明顯升高，該蛋白可通過調控鋅在溶酶體內的轉運從而調控T細胞γ-干擾素的表達。
　　乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化以及其慢性持續(xù)感染的確切機制尚未完全明了，大多學者認為宿主免疫系統(tǒng)與病毒相互作用這一因素是乙

5、型肝炎病毒感染慢性化的重要原因。在HBV持續(xù)感染患者中，不能產(chǎn)生有效的針對HBV的特異性細胞毒T淋巴細胞反應，從而不能有效的徹底清除HBV，是HBV感染慢性化、持續(xù)化的主要原因之一。近年來研究熱點逐漸趨向于天然免疫，有學者認為人體天然免疫系統(tǒng)功能受損可能是引起乙型肝炎病毒感染慢性化的重要機制。由于在人感染HBV的自然史中，早期沒有臨床癥狀，且HBV需感染5-6周后方才進入復制指數(shù)擴增階段，故而很難去分析人感染HBV早期機體的天然免疫狀態(tài)

6、。
　　本課題檢測乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達及HBV對THP-1中ZIP2、ZIP8表達的影響分化的巨噬細胞，觀察HBV對其ZIP2、ZIP8表達的影響。
　　研究目的:
　　本課題檢測乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達;并用乙肝病毒血清將人單核細胞白血病細胞(THP-1)分化的巨噬細胞進行刺激，觀察HBV對其ZIP2、ZIP8表達的影響，以期了解HBV感染過程中ZIP2、ZIP8表達的

7、變化，為HBV持續(xù)感染的分子免疫機制提供思路及理論基礎。
　　實驗方法:
　　一、臨床收集41例乙型肝炎患者、23例丙型肝炎患者以及39例正常人的抗凝外周血液樣本、原子吸收分光光度計檢測血清鋅含量、密度梯度離心法分離樣本的PBMC，通過Real-time PCR和Western-blot方法檢測PBMCs中鋅轉運體ZIP2、ZIP8的表達。
　　二、以不同乙肝病毒量血清刺激佛波酯(PMA)誘導的人單核細胞白血病細胞(T

8、HP-1)，實時定量PCR和Western-blot檢測刺激24h和48h后巨噬細胞中ZIP2和ZIP8表達，同時檢測細胞因子IL-6和TNF-α的mRNA水平的變化。實驗結果:
　　一、Real-time PCR和Western-blot結果顯示乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達量明顯低于正常對照組（P＜0.05）;不同病毒量的乙肝和丙肝患者之間相比，ZIP2和ZIP8的表達均沒有差異。
　　二

9、、不同乙肝病毒血清組巨噬細胞中ZIP2和ZIP8的表達在24h和48h較對照組上調，且高病毒含量組表達高于低病毒含量組。刺激48h后，高乙肝血清病毒含量組IL-6的表達相比對照組以及低乙肝病毒血清含量組上調，TNF-α的表達相比對照組以及低乙肝病毒血清含量組下調。
　　結論:
　　本研究在體內外檢測了乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達，結果顯示患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達下調;用不同H