頭頸部腫瘤放療患者骨代謝生化指標的檢測及意義.pdf

1、第一部分頭頸部腫瘤放療患者傳統(tǒng)骨代謝生化指標的檢測及意義 目的：通過檢測頭頸部腫瘤放療患者在接受不同劑量電離輻射時體液中的傳統(tǒng)骨代謝生化指標，以了解其在放療過程中的變化以及在監(jiān)測放射性頜骨損傷中的價值，探討電離輻射對成骨細胞和破骨細胞介導的頜骨骨代謝的影響，為進一步完善放射性頜骨損傷的病理機制提供理論依據(jù)。 對象和方法： 1．研究對象 中山大學附屬第五醫(yī)院腫瘤放療科2008年7月至2009年1月期間的就診

2、患者中，選擇臨床確診為頭頸部腫瘤，并且符合本實驗納入標準的病例30例，其中男性19例，女性11例，年齡34～74歲，平均年齡53歲，疾病種類包括：鼻咽癌22例、舌癌3例；腮腺癌術(shù)后2例、上腭癌術(shù)后1例；木村病1例；非霍奇金淋巴瘤1例。這些患者適合并愿意接受國際抗癌聯(lián)盟（International UnionAgainst Cancer，UICC）指引的規(guī)范化頭頸部腫瘤放療方案。研究前所有患者均簽署知情同意書。 2．研究方法

3、 2．1病例入選標準 1）經(jīng)臨床確診的頭頸部腫瘤患者，影像學檢查腫瘤病變未侵犯骨組織，無骨轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移，患者適合并愿意接受UICC指引規(guī)范化放療，頜骨在放射野內(nèi) 2）詳細詢問患者現(xiàn)病史、過去史、婚育史、家族史，排除患有糖尿病、甲甲狀腺和甲狀旁腺功能改變、肝腎功能不全、骨折、骨質(zhì)疏松、骨發(fā)育不良及各種遺傳性骨病等影響骨代謝的全身性疾病 3）患者在放療前半年內(nèi)未服用激素、降鈣素、鈣片、雙磷酸鹽、氟化物等影響骨代謝

4、的藥物 4）患者知情同意。 2．2標本采集及處理 留取每個入組病例三個時段的血液和尿液標本：即分別在患者接受放療前（0Gy）、接受電離輻射劑量30Gy后、接受電離輻射劑量50Gy后。按實驗計劃如期抽取患者清晨（7：00 am）空腹靜脈血5 ml于不抗凝無菌試管中，室溫下靜置30 min，待血液凝固后，以3000r/ min的速度離心10 min，取上層血清當即檢測血清堿性磷酸酶（alkaline phosphat

5、ase，ALP）、血鈣（calcium，Ca）、血磷（phosphate，P）；同時留取患者晨尿10 ml，立即檢測尿鈣（urine cacalcium，UCa）和尿肌酐（urine creatinine，UCr）。 2．3標本的檢測 血清ALP、Ca、P，尿Ca、Cr均使用日本日立7170S全自動生化分析儀測定，其中血ALP水平用AMP（α—aminc—αmethyl—l—propanol）緩沖液法測定；血P濃度用紫外

6、直接法測定；血Ca和尿Ca濃度用偶氮胂三法測定，尿Cr用苦味酸不除蛋白法測定，為了減少尿液濃度對尿鈣水平的影響，以尿Ca與尿Cr的比值（UCa/Cr）來表示尿鈣水平變化。 2．4統(tǒng)計處理 所有數(shù)據(jù)的運算均在計算機SPSS17．0統(tǒng)計軟件上進行。血清ALP、Ca、P濃度的變化比較采用配對t檢驗，實驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差（-x±s）表示；尿Ca/Cr水平變化用Mann—Whitney test檢測，數(shù)據(jù)用中位數(shù)±標準差（M±

7、SD）表示，兩種統(tǒng)計方法均以P值<0．05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1．反映骨形成的傳統(tǒng)骨代謝指標變化 1）患者在接受0Gy．30Gy、50Gy3種不同劑量的電離輻射后血清ALP、Ca水平變化：血清ALP、Ca在放療前（0Gy）、接受輻射劑量30Gy、接受輻射劑量50Gy時其水平依次下降，表現(xiàn)出隨著電離輻射劑量增加而逐漸下降的趨勢，但統(tǒng)計學檢驗差異無顯著性（P>0．05）。 2）患者在接受0Gy、30Gy

8、、50Gy3種不同劑量的電離輻射后血清P水平變化：在三種不同的輻射劑量下血P濃度基本穩(wěn)定，未見其由于電離輻射影響而產(chǎn)生變化的趨勢，統(tǒng)計學檢驗差異亦無顯著性。（P>0．05） 2．反映骨吸收的傳統(tǒng)骨代謝生化指標變化 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3種不同劑量電離輻射后U Ca/Cr水平變化：U Ca/Cr水平隨著接受電離輻射劑量增加而呈明顯下降趨勢，與放療前（0Gy）比較，患者在接受接受輻射劑量30Gy及50Gy后，

9、U Ca/Cr水平差異均有顯著性。（0Gy vs30Gy P<0．05；0Gy vs50Gy P<0．05）。提示頭頸部腫瘤患者在接受30Gy的電離輻射后，其頜骨組織中的破骨細胞活性和破骨細胞介導的骨吸收活動開始受到抑制。 結(jié)論： 1．傳統(tǒng)骨形成生化指標血ALP、Ca、P在監(jiān)測頜骨放射性骨代謝早期改變中不夠敏感。2．傳統(tǒng)骨吸收生化指標U Ca/Cr可能是能夠監(jiān)測頜骨放射性骨代謝早期改變的敏感的生化指標。 第二部分

10、頭頸部腫瘤放療患者新—代骨代謝生化指標的檢測及意義 目的：通過檢測頭頸部腫瘤患者在接受不同劑量電離輻射時血液中的新一代骨代謝生化指標血清骨堿性磷酸酶（bone alkaline phosphatase，BAP）、抗酒石酸酸性磷酸酶—5b（tartrate resistant acid phosphatase—5b，TRACP—5b），以了解血清BAP、TRACP—5b水平在放療過程中的變化，探討電離輻射對成骨細胞和破骨細胞介導的

11、頜骨骨代謝的影響以及血清BAP、TRACP—5b在監(jiān)測放射性頜骨損傷中的價值，為進一步完善放射性頜骨損傷的病理機制提供理論依據(jù)。 對象和方法： 1．研究對象：同第一部分 2．研究方法 2．1病例入選標準：同第一部分 2．2標本采集及處理： 留取每個入組病例三個時段的血液標本：即在患者接受放療前（0Gy）、接受電離輻射劑量30Gy、接受電離輻射劑量50Gy。按實驗計劃定期抽取患者晨起（7：0

12、0）空腹靜脈血5ml于不抗凝無菌試管中，室溫靜置30min，待血液凝固后，以3000r/min的速度離心10min，取上層血清，分裝在無菌Eppendof（EP）管中，并做好標記，置于—70℃冰箱保存待測血清BAP、TRACP—5b。 2．3標本的檢測 血清標本收齊后，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，EⅡSA）測定血清中BAP、TRACP—5b水平。嚴格按照試劑盒的

13、操作說明操作，在主波長405nm，次波長600nm的酶標儀上測得標準品、質(zhì)控品和各標本的吸光度值（optical density difference，OD405），將標準品的濃度和測得標準品的OD405值輸入計算機作回歸分析，以標準品的OD405值為縱坐標、標準品的濃度為橫坐標繪制出標準曲線，得出二者的相關(guān)方程，根據(jù)方程和質(zhì)控品及標本的OD405值計算出各質(zhì)控液、標本的濃度。 2．4統(tǒng)計處理 所有數(shù)據(jù)的運算均在計算機上

14、應用統(tǒng)計軟件SPSS17．0進行。對非正態(tài)分布的原始實驗數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布的資料，按正態(tài)分布作相關(guān)統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用配對t檢驗，P值<0．05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1．反映骨形成的新一代骨代謝生化指標BAP水平變化： 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3種不同劑量電離輻射后血清BAP水平變化：患者血清BAP水平隨著電離輻射劑量的增加而逐漸下降，在接受輻射劑量50Gy

15、后較放療前（0Gy）平均水平下降33．3％，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。結(jié)果提示頭頸部腫瘤患者在接受50Gy劑量的電離輻射后，頜骨組織中的成骨細胞活性和成骨細胞介導的骨形成活動明顯受到抑制，作為反映骨形成的指標，血清BAP與血清ALP、Ca在接受相同的電離輻射劑量下的變化趨勢是一致的，但是BAP的差異具有顯著性。 2．反映骨吸收的新一代骨代謝生化指標TRACP—5b水平變化： 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy

16、3種不同劑量電離輻射后血清TRACP—5b水平變化：患者血清TRACP—5b水平在3種輻射劑量下未見有明顯變化，差異亦無統(tǒng)計學意義。（P>0．05） 結(jié)論： 1．新一代骨形成生化指標血清BAP可能是能夠監(jiān)測頜骨放射性骨代謝早期改變的有價值的敏感指標。 2．新一代骨吸收生化指標TRACP—5b可能在監(jiān)測頜骨放射性骨代謝早期改變中不敏感。 3．新一代骨形成生化指標BAP較傳統(tǒng)指標ALP在反映頜骨放射性骨代謝改