基于水凝膠光子晶體微球低背景化學發(fā)光技術在農產品真菌毒素檢測中的應用研究.pdf

1、本文是基于水凝膠光子晶體微球和化學發(fā)光法建立的一套用于農產品中真菌毒素的多重檢測方法。本文研究的主要內容包括水凝膠微球的自組裝、水凝膠微球的表征、水凝膠微球表面的化學修飾、單重檢測農產品中伏馬毒素B1的條件優(yōu)化及其標準曲線的建立和回收率的測定、多重檢測農產品中伏馬毒素B1、黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A的條件優(yōu)化及其標準曲線的建立和回收率的測定、用液相色譜串聯(lián)質譜法檢測農產品中真菌毒素的回收率。
　　用水凝膠液填充SiO2三維光子晶

2、體微球內部空隙，使微球內部成為實心即得到水凝膠光子晶體微球。再利用掃描電子顯微鏡、光纖光譜儀對水凝膠微球進行表征。然后在水凝膠微球表面進行化學修飾，增強其與生物分子的結合能力。
　　水凝膠光子晶體微球不僅具有表面積大的優(yōu)勢，還因其內部是實心可以避免非特異性吸附，從而使得檢測的背景信號低，靈敏度更高，信號誤差更小。在伏馬毒素B1的單重檢測中優(yōu)化條件為:抗原包被緩沖液為pH=9.6的碳酸鹽緩沖液，抗原包被濃度為1000ng/mL，一抗

3、稀釋比率為1∶30000，HRP-IgG稀釋比率為1∶6000。用本法做線性回歸分析得線性范圍為0.0001-1ng/mL，標準曲線為y=-4037.89x+927.36，R2=0.997。之后對伏馬毒素B1單克隆抗體的特異性進行了探究，結果顯示特異性強，與伏馬毒素B1類似物無明顯交叉反應。將不同濃度的伏馬毒素B1添加到三種不同谷物中，分別測定其回收率，其回收率分別為:大米92.30±4.70％-107.59±8.07％、玉米78.91

4、±11.20％-99.70±0.42％、小麥78.60±0.71％-128.45±6.34％。
　　在多重檢測中，F(xiàn)B1、AFB1、OTA三種毒素的線性范圍為:0.001-10ng/mL、0.0001-1ng/mL和0.0001-1ng/mL。線性方程分別為:y=-2606.027x+3170.360(R2=0.995)、y=-2462.584x+1098.877(R2=0.996)、y=-2839.9661x+2163.278(

5、R2=0.997)。對大米、玉米和小麥三種農產品中分別添加FB1、AFB1、OTA標準品進行回收率測定，各真菌毒素回收率分別為，在大米中:FB174.96±5.82％-87.89±8.34％、AFB186.54±7.42％-95.84±8.31％、OTA79.29±4.99％-101.03±7.26％;在玉米中:FB178.95±1.97％-101.41±9.23％、AFB187.27±5.11％-97.07±8.60％、OTA82.7

6、9±4.53％-95.92±8.83％;在小麥中:FB188.56±7.64％-104.87±5.77％、AFB186.53±5.35％-102.80±5.37％、OTA84.59±6.34％-92.84±5.79％。
　　本法與液質聯(lián)用法對比可知，液質聯(lián)用法測得回收率與本法檢測結果基本一致，20份谷物樣品中毒素的檢測結果的相關性方程及相關性系數(shù)分別為:FB1y=1.105x+0.084(R2=0.945);AFB1y=1.127