BMP-2、P21、P53、AP-1在燃煤型氟斑牙仔鼠牙胚發(fā)育中的表達(dá)研究.pdf

1、中國(guó)是全球氟中毒最嚴(yán)重的國(guó)家之一。我國(guó)氟中毒流行病區(qū)很多,幾乎各省都有慢性氟中毒的報(bào)道,而貴州是燃煤污染型地方性氟中毒的高發(fā)地區(qū)。氟斑牙是地區(qū)性慢性氟中毒的一種突出癥狀。一般認(rèn)為慢性地方性氟中毒的發(fā)病機(jī)制與過(guò)量的氟破壞了鈣磷的正常代謝、抑制某些酶的活性、損害細(xì)胞原生質(zhì)以及抑制膠原蛋白合成有關(guān)。但關(guān)于燃煤型氟斑牙產(chǎn)生的分子機(jī)制的研究報(bào)道不多,許多研究結(jié)果有待證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制燃煤型氟斑牙大鼠動(dòng)物模型,檢測(cè)出生第1、3、5、7、14天仔鼠

2、牙胚組織中骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Bone Morphogenetic Protein2, BMP-2),信息傳遞G蛋白類癌基因ras家族表達(dá)產(chǎn)物P21,腫瘤抑制基因(tumor suppressor gene)P53,轉(zhuǎn)錄激活因子(transcription activitor,AP-1)的表達(dá)變化,初步探索燃煤型氟斑牙發(fā)生的分子發(fā)病機(jī)制,為燃煤型氟斑牙發(fā)病機(jī)制的研究提供一定的理論依據(jù)。
　　目的:模擬燃煤型氟中毒病區(qū)環(huán)境,建立 S

3、D大鼠動(dòng)物模型,研究燃煤型氟斑牙仔鼠下切牙牙胚組織中 BMP-2、P21、P53和 AP-1表達(dá)的情況,從而探討這些因子與燃煤型氟斑牙發(fā)生的關(guān)系。
　　方法:1、動(dòng)物模型建立:36只3周齡清潔級(jí)SD大鼠,雌雄比例2:1,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各18只。將實(shí)驗(yàn)組放置于模擬燃煤型氟中毒病區(qū)環(huán)境的室內(nèi),飼含氟40mg/kg飼料。對(duì)照組放置于普通空氣環(huán)境的室內(nèi)并飼普通飼料。兩組均飲用去離子水。
　　2、檢測(cè)內(nèi)容及方法:每周稱量大鼠的

4、體重,拍攝牙齒照片,觀察大鼠切牙的變化。八周齡時(shí)將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠分別按雌雄比例2:1合籠,飼養(yǎng)條件不改變情況下交配成功并產(chǎn)仔。將出生第1、3、5、7、14天仔鼠處死并于體視顯微鏡下分離提取出下切牙牙胚,通過(guò) HE染色切片確定為牙胚組織。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)來(lái)觀察BMP-2、P21蛋白在牙胚發(fā)育過(guò)程中的組織學(xué)定位。運(yùn)用熒光定量 PCR技術(shù)檢測(cè)BMP2、P21、P53、AP-1在牙胚發(fā)育的不同階段中mRNA的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)

5、果:1、本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制燃煤型氟斑牙SD大鼠動(dòng)物模型。在第4周左右,可觀察到實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)氟斑牙,并且病情逐漸加重。在第8周以后實(shí)驗(yàn)組氟斑牙形態(tài)基本固定。
　　2、第1、3、5、7、14天,過(guò)量氟對(duì)BMP-2基因的表達(dá)有抑制作用。在第1、3、5、7天,過(guò)量氟對(duì)P21基因的表達(dá)有抑制作用。C-Fos和P53基因在第1、3天表達(dá)受過(guò)量氟抑制,而在第5、7、14天表達(dá)增高。C-Jun基因在第1、3天表達(dá)也受過(guò)量氟抑制,而在第5、7天表達(dá)增高。