曼氏裂頭蚴超微結(jié)構(gòu)的觀察及不同理化因素對裂頭蚴感染性影響的研究.pdf

1、目的：曼氏裂頭蚴病是一種重要的食源性寄生蟲病，近年來，對食源性曼氏裂頭蚴病的研究主要集中在中間宿主的感染率調(diào)查和病例報道上，在免疫學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)也有一些研究，而對裂頭蚴結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系，不同理化因素對裂頭蚴感染性的研究甚少，本實驗在前期工作的基礎(chǔ)上，就以下幾方面展開了研究：
　　1、建立小鼠動物模型，利用組織學(xué)動態(tài)觀察小鼠體內(nèi)不同發(fā)育時間的裂頭蚴和寄生組織的病理學(xué)特點。
　　2、利用電鏡技術(shù)對曼氏裂頭蚴進行超微結(jié)

2、構(gòu)的觀察，進一步了解裂頭蚴結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系。
　　3、通過不同理化因素對裂頭蚴進行體外處理后再感染小鼠，以此了解不同理化因素對裂頭蚴感染性的影響。
　　方法：
　　1、實驗動物感染：在貴陽市農(nóng)貿(mào)市場購買黑斑蛙，從黑斑蛙中分離出裂頭蚴，感染昆明小鼠，實驗組以3條/只通過口服法感染，對照組不感染裂頭蚴，建立小鼠動物模型，于感染后第2、4、6、8、10周分別處死小鼠，肉眼觀察蟲體寄生部位組織的病理損傷情況。
　　2、常

3、規(guī)組織病理學(xué)觀察：選取實驗組中含裂頭蚴的小鼠組織和對照小鼠組相應(yīng)部位的組織制作病理組織切片，行HE染色，利用光學(xué)顯微鏡觀察。
　　3、電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察：取黑斑蛙大腿肌肉內(nèi)的曼氏裂頭蚴，將其頭頸部修整好，戊二醛固定，作常規(guī)電鏡觀察標(biāo)本處理后，應(yīng)用掃描電鏡和透射電鏡觀察裂頭蚴表面及皮層的超微結(jié)構(gòu)。
　　4、理化因素處理：選取含裂頭蚴的蛙肉，進行如下處理：
　　(1)將含裂頭蚴的蛙肉分別放入-20℃、4℃、20℃、37℃、5

4、6℃的冰箱和電熱培養(yǎng)箱中，處理時間分別為1h、2h、3h，其中設(shè)20℃為對照組。
　　(2)將含裂頭蚴的蛙肉分別放入不同濃度的酒精(20％、30%、40%、50%、60%)及生理鹽水中，分別浸泡1h、2h、3h，其中將生理鹽水組設(shè)為對照組。
　　(3)將含裂頭蚴的蛙肉分別放入100%雞膽汁、100%生姜汁、食用醋(總酸濃度4.5﹪，pH3.05)、食用醬油(含19.3﹪NaCl)及生理鹽水中分別浸泡3h、6h、12h、24h

5、，其中將生理鹽水組設(shè)為對照組。
　　(4)將含20條裂頭蚴的蛙肉塊放入勻漿攪拌機中進行處理3min，將勻漿平均喂飼小鼠6只。
　　經(jīng)過以上處理后，所有實驗組及對照組小鼠喂食飼料1周后處死，觀察小鼠體內(nèi)的裂頭蚴存活率。
　　結(jié)果：
　　1、小鼠動物模型建立及組織病理學(xué)改變：小鼠經(jīng)口感染后，分別于第2、4、6、8、10周剖殺小鼠發(fā)現(xiàn)：裂頭蚴寄生部位大多為小鼠背部及腹部皮下,頸項部、背部、腋部肌肉及腹腔內(nèi)，而胸腔內(nèi)及其

6、他部位較少見。寄生數(shù)目1～3條不等，裂頭蚴較蛙體內(nèi)大。肉眼觀察可見寄生部位有彌漫性淤血瘀斑，少數(shù)還可見囊包塊形成等。HE染色發(fā)現(xiàn)病變部位脂肪組織及橫紋肌組織變性、壞死，中度纖維組織增生并包繞脂肪組織，少部分血管纖維素樣壞死等。另外，病變部位早期是以中性粒細胞浸潤為主的急性炎癥，隨著病程的進展，局部組織的損傷程度不斷加重，炎癥范圍不斷擴大，并出現(xiàn)以淋巴細胞浸潤為主的慢性炎癥反應(yīng)。
　　2、掃描電鏡下，裂頭蚴不分節(jié)，但有不規(guī)則的橫皺褶

7、。體前端無吸槽，頂端中央有一橫向孔向內(nèi)凹陷，凹陷周圍體壁呈唇狀突起。體表的質(zhì)膜內(nèi)陷形成大小不等的凹陷與溝紋，裂頭蚴體表密布微毛；透射電鏡下，裂頭蚴的體壁由皮層和實質(zhì)區(qū)組成。微毛位于皮層的外表面，呈尖棘狀。基質(zhì)區(qū)內(nèi)有許多形態(tài)各異的顆粒狀分泌小體、空泡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體，其中線粒體多位于近基膜處。實質(zhì)區(qū)有表層肌、皮層細胞、實質(zhì)細胞、成石灰小體細胞及排泄系統(tǒng)等分布，并可見皮層細胞形成的胞質(zhì)連接通過基膜伸向基質(zhì)區(qū)。
　　3、(1)裂頭蚴經(jīng)不

8、同溫度（-20℃、4℃、20℃、37℃、56℃）處理1h后再感染小鼠，1周后處死小鼠，各溫度處理1h組與對照組（20℃處理1h組）感染性的比較，均P＞0.05；處理2h后，其中-20℃和56℃處理2h時間組與對照組（20℃處理2h組）比較，均P＜0.05；處理3h后，其中-20℃、4℃和56℃處理3h時間組與對照組（20℃處理3h組）比較，均P＜0.05。(2)不同濃度的酒精（20%、30%、40%、50%、60%）和生理鹽水分別浸泡含

9、裂頭蚴的蛙肉1h后，其中20%、30%和40%處理1h時間組與對照組（生理鹽水處理1h組）感染性的比較，均P＞0.05；處理2h后，除20%組外，均P＜0.05；3h后，除20%組外，均P＜0.05。(3)100%雞膽汁、100%生姜汁、食用醋、食用醬油和生理鹽水分別浸泡含裂頭蚴的蛙肉3h、6h、12h、24h，100%雞膽汁和100%生姜汁不同處理時間組與對照組（生理鹽水組）相應(yīng)處理時間組的感染性比較，均 P＞0.05；醋和醬油不同處

10、理時間組與對照組相應(yīng)處理時間組感染性比較，均P＜0.05。(4)經(jīng)攪拌機處理后的裂頭蚴勻漿，發(fā)現(xiàn)裂頭蚴仍然有33.33%的存活率。
　　結(jié)論：
　　1、裂頭蚴感染昆明小鼠后，裂頭蚴可在小鼠的各組織器官內(nèi)寄生，其中以皮下寄生最為常見，其次為頸項部、背部及腋部肌肉內(nèi)寄生。裂頭蚴寄生處的組織隨著病程的進展出現(xiàn)不同程度的急、慢性炎癥反應(yīng)為主的病理損傷。
　　2、對蛙體內(nèi)的裂頭蚴進行掃描電鏡和透射電鏡的觀察，發(fā)現(xiàn)裂頭蚴的體表、微

11、毛及體壁的超微結(jié)構(gòu)與豬帶絳蟲囊尾蚴有相似之處，研究結(jié)果為絳蟲幼蟲的分類和鑒定提供更為詳細的依據(jù)，為功能的研究奠定基礎(chǔ)。
　　3、含裂頭蚴的青蛙肌肉經(jīng)不同溫度處理后發(fā)現(xiàn)，低溫（-20℃）和高溫（56℃）對蛙肉內(nèi)裂頭蚴的感染性影響較大，在-20℃的條件下儲藏2h，能使裂頭蚴對小鼠的感染性完全喪失；在56℃的條件下儲藏3h，就能使裂頭蚴在小鼠體內(nèi)的存活率下降50%以上，表明低溫儲藏和高溫加熱肉類食物一定時間具有較高的安全性，可有效防止曼