納米銀涂層抗菌塑料支架治療膽漏實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：膽漏(biliaryleakage)常發(fā)生在膽道或膽道鄰近臟器的損傷之后。跨過(guò)乳頭括約肌將內(nèi)支架置入膽管，可以降低膽管壓力，減少膽汁外漏，從而達(dá)到治療膽漏的目的。但支架置入膽管常見(jiàn)并發(fā)癥是膽管炎、支架阻塞。早期的研究中發(fā)現(xiàn)，阻塞的支架中可以見(jiàn)到大量的細(xì)菌菌落。使用目前材料制作的支架及附件均無(wú)抗菌作用。研究證明低濃度的銀離子對(duì)微生物具有殺滅作用。降低銀顆粒的尺寸使其達(dá)到納米級(jí)，可大大提高其抗菌活性。膽管納米銀涂層抗菌塑料支架的

2、應(yīng)用未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬制備膽管納米銀涂層塑料支架，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討其抗菌性能及治療膽漏效果，以期為膽漏治療提供一種具有抗菌作用的新型支架，為其進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料和方法：1）通過(guò)化學(xué)氧化還原法，以膽管聚四氟乙烯支架為載體，硝酸銀為原料，制備膽管納米銀涂層塑料支架，通過(guò)掃描電鏡（SEM）、透射電鏡（TEM）、X射線能譜分析(EDXA)等技術(shù)檢測(cè)納米銀涂層微觀形態(tài)和化學(xué)成分；通過(guò)掃描隧道顯微鏡（STM）

3、檢測(cè)納米銀涂層塑料膽管支架的彈性系數(shù)和摩擦系數(shù)；2）通過(guò)定性及定量實(shí)驗(yàn)探討納米銀涂層塑料支架對(duì)腸道代表菌群大腸桿菌抗菌活性；采用SEM觀察納米銀涂層塑料支架干預(yù)大腸桿菌粘附性能；3）8只健康巴馬小型豬為研究對(duì)象，全麻下行腹腔鏡手術(shù)，距膽囊管根部0.5-1.0cm處離斷膽囊管，膽囊管殘端開(kāi)放，剝離切除膽囊；通過(guò)術(shù)前、術(shù)后24小時(shí)監(jiān)測(cè)血常規(guī)、肝功；術(shù)后24小時(shí)行ERC；死亡動(dòng)物及時(shí)解剖，存活動(dòng)物術(shù)后48小時(shí)處死解剖觀察膽囊管殘端等方法綜合判

4、斷腹腔鏡下造?？尚行?；4）40只健康巴馬小型豬用于研究。腹腔鏡下建立膽漏動(dòng)物模型，隨機(jī)分為3組，內(nèi)鏡下豬膽管置入膽管納米銀涂層聚四氟乙烯支架（n=15)、普通膽管聚四氟乙烯支架（n=15)、對(duì)照組（造模后常規(guī)抗炎治療，n=10）。及時(shí)解剖術(shù)后死亡動(dòng)物，了解死亡原因。術(shù)前及術(shù)后隨訪抽血檢測(cè)血常規(guī)、肝功；術(shù)后10天、20天隨訪處死各組1/2存活動(dòng)物,通過(guò)透視了解支架位置，無(wú)菌操作取出支架，支架剖開(kāi)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)；通過(guò)SEM觀察支架各段表面菌斑

5、情況并比較；通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察豬十二指腸乳頭部、膽總管各段組織病理學(xué)變化并比較。
　　結(jié)果：1）成功制備膽管納米銀涂層聚四氟乙烯支架，納米顆粒大小在5-80nm。納米銀涂層僅含有Ag；在一定范圍內(nèi)，納米銀涂層（0.5-5um）厚度增加，支架彈性系數(shù)（楊氏模量）增大，摩擦系數(shù)減?。?）定性抗菌實(shí)驗(yàn)：普通膽管支架周圍沒(méi)有形成抑菌圈；納米銀膽管支架周圍可見(jiàn)有抑菌圈，直徑為6.47±0.74mm。2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p﹤0.05）；

6、定量抗菌實(shí)驗(yàn)：長(zhǎng)0.5cm，直徑8.5Fr支架與106CFU/ml及104CFU/ml大腸桿菌菌懸液接觸處后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組菌懸液（膽管納米銀涂層塑料支架）菌落數(shù)逐漸下降，接觸6小時(shí)，106CFU/ml及104CFU/ml菌懸液中大腸桿菌被幾乎全部被殺死，抗菌率達(dá)到100％；對(duì)照組菌懸液（普通膽管塑料支架）菌落數(shù)逐漸升高。SEM觀察：膽管納米銀涂層塑料支架具有較強(qiáng)的干預(yù)大腸桿菌粘附作用；3）腹腔鏡下能充分暴露膽囊、膽囊管、膽

7、囊動(dòng)脈，顯示膽囊與肝臟及膽囊管與膽總管的解剖關(guān)系。與術(shù)前相比，術(shù)后24小時(shí)白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、直接膽紅素明顯升高（p﹤0.05）。8只實(shí)驗(yàn)豬7只距膽囊管根部0.5-1.0cm處離斷膽囊管，1只距膽囊管根部約2cm處離斷膽囊管；8只實(shí)驗(yàn)豬行ERC,7只造影劑明顯外漏,1只造影劑外漏不明顯；4）40頭實(shí)驗(yàn)豬成功造模、30只內(nèi)鏡下置入支架，10只對(duì)照觀察。支架組3只實(shí)驗(yàn)豬術(shù)后20-38小時(shí)內(nèi)死亡，解剖死亡原因?yàn)槟懣偣艽┛住?duì)照組10只術(shù)后5天

8、內(nèi)全部死亡，死亡原因膽汁性腹膜炎伴感染。對(duì)照組死亡率與2支架組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p﹤0.05）；術(shù)后10天，2支架組白細(xì)胞水平均較術(shù)前明顯增高（p﹤0.05），術(shù)后20天，普通支架組白細(xì)胞水平較術(shù)前明顯增高（p﹤0.05），納米銀支架組較術(shù)前無(wú)明顯變化（p＞0.05）；術(shù)后10天、20天，所有實(shí)驗(yàn)豬支架內(nèi)容物細(xì)菌培養(yǎng)菌均陽(yáng)性，比較無(wú)差異（p＞0.05）；2組均出現(xiàn)膽總管穿孔，支架異位，比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；掃描電鏡

9、觀察，納米銀支架及普通支架表面均有數(shù)量不等的炎性附著物或結(jié)晶體黏附在支架表面，細(xì)菌分布其中。納米銀支架表面粘附細(xì)菌明顯少于普通支架。組內(nèi)比較，下段膽管支架表面粘附細(xì)菌較中段、上段膽管支架多；光學(xué)顯微鏡觀察豬十二指腸乳頭部、膽總管各段組織病理學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)納米銀支架組、普通支架組膽管粘膜上皮不同程度缺失，壁內(nèi)可見(jiàn)血管擴(kuò)張充血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)。但普通支架組膽管全層炎細(xì)胞浸潤(rùn)更為明顯，部分切片可見(jiàn)膿腫形成。
　　結(jié)論：1）通過(guò)化學(xué)氧化還原法，