D-半乳糖過荷模型中的聽力改變及其機制的研究.pdf

1、平中井鬟大幸一醇‘牽盹博士豐土論文粒體DNA和核DNA時則可選擇酚一氯仿法或Trizol法，其中酚一氯仿法的得率和質(zhì)量更高，但耗時稍長而Trizol法則可同時提取到總DNA和總RNA，所得的DNA和RNA經(jīng)PCR擴增均可擴增出核片段和線粒體片段。關(guān)鍵詞核酸；線粒體DNA；線粒體RNA；核DNA；核RNA第二部分D半乳糖注射致早衰大鼠模型的建立及相關(guān)的聽力變化目的探討對大鼠進行兩種劑量的D一半乳糖注射后，大鼠聽力、內(nèi)耳組織酶活力變化及各器

2、官中線粒體DNA4834bp缺失(cD)及其它缺失突變的發(fā)生情況。材料與方法分別用高劑量(150mg／kg／d)和低劑量(30mg／kg／d)D半乳糖對大鼠進行每日頸背部皮下注射共8周造成D一半乳糖過荷模型，以生理鹽水作對照組，比較造模前后大鼠ABR閾移判斷其聽力變化。然后處死動物，取出大鼠的心、肝、腦、顳肌、腎臟、內(nèi)耳組織，并從腹主動脈抽出lml血。應(yīng)用試劑盒檢測內(nèi)耳組織酶活力，巢式PCR檢測各器官cD及其它缺失的發(fā)生情況。結(jié)果150

3、mg／kg／d半乳糖組和SOmg／kg／d半乳糖組大鼠的內(nèi)耳組織GSHPx和Na，KATPase酶活力降低較對照組降低(5“184，686129V1140222activityunit；034004。040_008VO64016Ilmolpi／mgprot／houf)，在高劑量組變化尤為明顯。但相應(yīng)的聽力變化并不明顯(PO05)。在各器官中，肝臟和顳肌的cD發(fā)生率最高，而內(nèi)耳和血細(xì)胞中發(fā)生率則明顯低于其它組織，尤其在血細(xì)胞中最低。同時檢

4、測了nt5253～7244，nt7153～9193，nt9176～11431，ntll269～13444和ntl3933～16278共5個區(qū)段內(nèi)的2kb以下缺失突變，結(jié)果所有標(biāo)本中無陽性發(fā)現(xiàn)。結(jié)論每日皮下注射D一半乳糖8周可致大鼠早衰狀態(tài)，早衰大鼠的生化指標(biāo)和cD發(fā)生率都隨之明顯改變，但內(nèi)耳cD的發(fā)生也許并不足以導(dǎo)致大鼠聽力的變化而在用巢式PCR對cD的檢測中用外周血作標(biāo)本時可能出現(xiàn)“假陰性”，即檢出率低于實際突變率的情況。應(yīng)用特定組織