高脂飼料誘導的肥胖鼠腸道內硫酸鹽還原菌的定量檢測與分離鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、肥胖是指體內脂肪積累至可能對健康造成不良影響的程度,造成期望壽命下降和/或健康問題。超重和肥胖是全球第六大健康隱患,會增加人體患多種疾病的概率,如2型糖尿病、心血管疾病和結腸癌。世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計,截止2008年,全球已有超過14億成年人體重超標,其中超過5億為肥胖;WHO預計到2015年,超重成年人數目將上升為23億,其中7億為肥胖。
  大量研究表明,腸道菌群的結構改變與肥胖關系密切。硫酸鹽還原菌(Sulfate-re

2、ducing Bacteria,SRB)是人及動物腸道菌群的成員之一,它是以有機化合物或無機化合物為電子供體,還原硫酸鹽產生硫化物的厭氧微生物。硫化氫是一種細胞毒化合物,可以通過抑制丁酸鹽氧化導致結腸上皮細胞受損甚至死亡,引起炎癥反應。同時,革蘭氏陰性SRB細胞壁上的脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)是肥胖的誘因之一。因此,研究腸道內SRB與肥胖的關系具有重要意義。
  本研究首先采用熒光定量PCR的方法,選

3、擇ap rA基因作為S R B的分子標記,對高脂飼料誘導的肥胖實驗鼠腸道內SR B的數量進行測定,以驗證SRB與肥胖之間的相關性。20只Wistar大鼠平均分為2組,分別飼喂高脂飼料和正常飼料,0、8、18周時采集糞樣和體重(數據);24只C57BL/6J小鼠同樣平均分為2組,分別飼喂高脂飼料和正常飼料,0、6、16周時采集糞樣和體重(數據)。對所有糞樣內的SRB進行定量檢測,并統(tǒng)計體重和定量結果,發(fā)現高脂飼料組的大鼠和小鼠的體重顯著高

4、于各自正常飼料組,同時高脂飼料組大鼠和小鼠腸道內SR B的數量也顯著高于各自正常飼料組。大鼠實驗和小鼠實驗的結果均證實了SRB與肥胖相關。
  為了深入研究腸道中SRB的功能以及與肥胖發(fā)生的關系,本論文對小鼠腸道中的SR B進行了分離和鑒定。從正常飼料和高脂飼料飼喂的C57BL/6J小鼠腸道內共分離得到149株SRB菌株,并使用基于16S rRNA基因序列的核糖體DNA PCR擴增產物限制性內切酶酶切分析技術(ARDRA)和基于全

5、基因組序列的腸桿菌基因間保守重復序列(ERIC序列)PCR指紋圖譜技術對分離物進行多樣性分析后發(fā)現:149株分離物的ARDRA類型單一,但可分為7個ERIC型;經ERIC型代表菌株的16S rRNA基因測序和ARB軟件進化地位分析,7個代表菌株的最近鄰居雖不同但均屬脫硫弧菌屬。SRB純菌株的獲得為進一步研究SRB的生理生化特性和功能提供了菌種支持。
  為驗證SRB是否具有導致實驗動物肥胖的作用,需進行SR B的動物回接實驗。為將

6、外源SRB與動物腸道內的原住SRB進行區(qū)分以及活菌回收,選擇來自肥胖小鼠腸道的SRB分離物中生長速度最快的菌株 FB8,進行利福平抗性篩選,最終成功獲得抗性菌株3株。FB8利福平抗性菌株的獲得,為SRB的動物回接實驗奠定了基礎。
  綜上所述,為研究SRB與肥胖之間的關系,本研究首先采用定量PCR的方法檢測肥胖大鼠和肥胖小鼠腸道內SR B的數量變化,證實了肥胖實驗鼠腸道內SRB的數量顯著上升,說明SRB與肥胖之間有相關性。然后為獲

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