浙貝母病害的檢測和茯苓多糖對鱉非特異性免疫的作用.pdf

1、浙貝母是百合科多年生鱗莖類藥用植物，具有清熱、潤肺、散結、止咳和化痰等功能。寧波市是浙貝母的主產區(qū)，田間栽培長期用球莖做種，容易受病菌感染、腐爛，影響產量與品質。本工作建立了一種簡單、經濟、快速并適合于浙貝母RNA的提取方法，即氯化鋰沉淀法。另外異硫氰酸胍、Tris-phenol等方法也能有效地從浙貝母組織中提取出RNA。依據當?shù)爻Ｒ娀蛘呷菀浊秩话俸峡频牟《緸橐罁铣?0對引物；首次采用RT-PCR對種植區(qū)內隨機采集的浙貝母的葉片以及

2、離體條件下培養(yǎng)的浙貝母組織進行了病毒檢測。RT-PCR檢測結果表明，野外的樣本攜帶馬鈴薯卷葉病毒和百合斑駁病毒，分別擴增到336 bp和513 bp的特異性條帶，與預期的片斷大小一致；但是在組織培養(yǎng)的外植體中未發(fā)現(xiàn)PLRV和LMoV。這兩種病毒在大田中的分布頻率分別為40％和12.5％。 此外，采用雙向電泳技術（2-D）結合組織培養(yǎng)技術初步分析了被真菌感染的浙貝母球莖的蛋白質表達變化。SDS-PAGE電泳表明，被真菌感染了的浙貝

3、母樣本比未感染的浙貝母樣本出現(xiàn)了兩條明顯條帶，約為35.0 kDa和25.0 kDa。同時，前者中的三條蛋白質帶（分別約30.0，20.0,16.0 kDa）的豐度較后者要低。雙向電泳后，經PDQuest軟件分析，發(fā)現(xiàn)被感染的球莖塊與未被感染的球莖在蛋白質表達有明顯差異。被真菌感染的樣本出現(xiàn)6個新的蛋白質點，而有4個蛋白質點只在未被真菌感染的樣本中表達。另外，相對于健康的樣本，被真菌感染的浙貝母球莖塊，有7個蛋白質點表達量明顯升高，而有

4、10個蛋白質點表達量下降。 茯苓為常用草藥，是多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。茯苓多糖具有抑菌，增強免疫力，抑制腫瘤生長和清除自由基等功效。本實驗采用口服的方式，初步研究了茯苓多糖對中華鱉非特異性免疫功能影響的試驗結果。試驗共分為3個組，在中華鱉飼料中添加20.0mg／kg．B．W．茯苓多糖作為試驗組，將添加500.0 mg／kg.B.W.免疫多糖（酵母細胞壁）作為免疫刺激劑對照組，以投喂未添加茯苓多糖和免疫多糖（酵母細胞壁）飼料的

5、作為空白對照組。連續(xù)投喂28 d后，取中華鱉的血液，測定了中華鱉血液中自細胞的吞噬活性、血清溶菌活力和補體活性。研究結果表明，在中華鱉飼料中添加茯苓多糖和免疫多糖（酵母細胞壁）能顯著提高中華鱉白細胞的吞噬活性，而2個試驗組之間中華鱉血液中自細胞的吞噬活性沒有顯著差異，2個試驗組中華鱉血清中補體C3和C4的活性與對照組之間出現(xiàn)顯著差異，而試驗組之間無顯著性差異。研究結果證明在中華鱉餌料中添加茯苓多糖和免疫多糖（酵母細胞壁）對中華鱉的非特異