黃芩苷和蝦青素對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性免疫特性影響的研究.pdf

1、本論文通過(guò)養(yǎng)殖試驗(yàn)和細(xì)菌攻毒試驗(yàn)分析了兩種植物提取物黃芩苷和蝦青素對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性免疫酶及其免疫相關(guān)基因影響的研究。研究分為三部分：
　　 第一部分：黃芩苷對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性免疫特性的影響
　　 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯坎煌瑵舛鹊狞S芩苷對(duì)中國(guó)對(duì)蝦體內(nèi)免疫相關(guān)酶活性的影響。用含不同濃度梯度(0g·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1和150mg·kg-1)黃芩苷的飼料連續(xù)投喂健康的中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenae

2、uschinensis)，于給藥第1，3，5，7，9，11d采集實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦的血淋巴、肝胰腺、肌肉組織，測(cè)定不同組織的酸性磷酸酶(ACP)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、一氧化氮合酶(INOS)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化，研究黃芩苷對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性免疫酶活指標(biāo)和解毒代謝能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中、高濃度處理紐血淋巴、肝胰腺、肌肉組織的ACP、INOS、SOD在第3d后呈上升趨勢(shì)，分別達(dá)到峰值后趨于穩(wěn)定狀態(tài)，亦比同期對(duì)

3、照組差異顯著(P<0.05)：低濃度黃芩苷處理組各種酶活性比同期對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)，而低、中、高濃度處理組血淋巴LSZ酶活性比同期對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。各種酶活亦存在組織差異性，其中ACP、CAT活性肝胰腺中活性最高，肌肉和血淋巴次之；而INOS、LSZ、SOD活性，血淋巴中最高，肌肉和肝胰腺次之。同時(shí)攻毒試驗(yàn)表明，黃芩苷能有效地降低試驗(yàn)組中國(guó)對(duì)蝦的死亡率，提高免疫保護(hù)率，其中中濃度處理組的保護(hù)效果為最佳。因此

4、，在飼料中添加黃芩苷能顯著提高中國(guó)對(duì)蝦的免疫相關(guān)酶活，增強(qiáng)非特異性免疫功能及降低中國(guó)對(duì)蝦對(duì)病原的敏感性，增強(qiáng)機(jī)體抗病力，同時(shí)其研究結(jié)果也為黃芩苷在對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程的應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。
　　 第二部分黃芩苷對(duì)中國(guó)對(duì)蝦toll樣受體基因的表達(dá)影響及抗鰻弧菌感染的研究
　　 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯坎煌瑵舛鹊狞S芩苷對(duì)中國(guó)對(duì)蝦體內(nèi)免疫相關(guān)基因的影響。用熒光定量的方法檢測(cè)投喂不同濃度的黃芩苷(0g·kg-1、50mg·kg-1、100

5、mg·kg-1和150mg·kg-1)后，于給藥第1，3，5，7，9，11d后采集實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦肌肉、血淋巴和肝胰腺toll樣受體mRNA表達(dá)量，以及用濃度為108cell/ml的鰻弧菌進(jìn)行攻毒，注射劑量50ul/尾，并放養(yǎng)在200L的聚乙烯桶中，于0、12、24、48、72及96h統(tǒng)計(jì)死亡率和免疫保護(hù)率。研究結(jié)果表明：三個(gè)濃度組黃芩苷對(duì)中國(guó)對(duì)蝦肌肉、血淋巴和肝胰腺toll樣受體mRNA表達(dá)量有顯著的抑制作用。黃芩苷有可能是抑制NF-KB的活

6、性可阻斷炎癥的關(guān)鍵啟動(dòng)步驟及其次級(jí)炎癥反應(yīng)，由此可以大膽推測(cè)出黃芩苷能夠通過(guò)NF-KB途徑間接的抑制TLR基因mRNA的表達(dá)量，從而抑制先天免疫系統(tǒng)產(chǎn)生炎癥因子，相對(duì)提高了吞噬細(xì)胞的吞噬能力，增強(qiáng)天然免疫細(xì)胞的殺傷能力。同時(shí)攻毒試驗(yàn)表明，黃芩苷能有效地降低試驗(yàn)組中國(guó)對(duì)蝦的死亡率，提高免疫保護(hù)率，其中中濃度處理組的保護(hù)效果為最佳。
　　 第三部分：蝦青素和裂壺藻對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性免疫特性的研究，在基礎(chǔ)口糧中分別添加A組50mg/k

7、g蝦青素、B組100mg/kg、C組150mg/kg、D組50mg/kg蝦青素+10‰裂壺藻、E組100mg/kg蝦青素+10‰裂壺藻、F組150mg/kg蝦青素+10‰裂壺藻，空白組A，空白組B，于給藥第1，5，10，15，20，25d采集實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦的血淋巴、肝胰腺、肌肉和鰓組織非特異性酶活的變化情況，結(jié)果表明：
　　 (1)與對(duì)照組相比，中國(guó)對(duì)蝦血清、肌肉和鰓組織蛋白含量均顯著增加，而肝胰腺蛋白含量變化不大；在含有裂壺藻的低、

8、中、高三個(gè)濃度組中，高濃度組蛋白含量高于同期其他各組。
　　 (2)蝦青素和裂壺藻對(duì)中國(guó)對(duì)蝦血清SOD活力影響具有顯著的劑最效應(yīng)，單獨(dú)投喂蝦青素高濃度組血清顯著高于對(duì)照組，混合投喂蝦青素和裂壺藻組SOD活力在第25d顯著高于同期單獨(dú)投喂蝦青素各組。無(wú)論是單獨(dú)投喂蝦青素處理組還是混合投喂的各個(gè)濃度組肝胰腺和肌肉SOD活力均呈現(xiàn)顯著上升的趨勢(shì)，并且其影響具有顯著的劑量效應(yīng)。混合投喂組F對(duì)SOD活力影響最為顯著。蝦青素和裂壺藻對(duì)中國(guó)對(duì)

9、蝦鰓的T-SOD活力影響不大，只是在混合投喂組D在第5d出現(xiàn)峰值
　　 (3)單獨(dú)投喂蝦青素和混合投喂的各濃度組，血清、肝胰腺、肌肉CAT酶活力均高于同期的對(duì)照組，均有促進(jìn)作用。其中混合投喂的各個(gè)濃度組血清CAT酶活力比單獨(dú)投喂蝦青素的處理組對(duì)蝦血淋巴CAT首每活力差異性顯著(P<0.05)，混合投喂E組在第10d有峰值?；旌贤段笷組肝胰腺CAT活力在第20d有峰值，并且是同期單獨(dú)投喂蝦青素C組CAT酶活的27倍。混合投喂組D組

10、、F組對(duì)肌肉CAT酶活力呈現(xiàn)促進(jìn)作用，且蝦青素濃度越高促進(jìn)作用越明顯，呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)?；旌贤段菇M和單獨(dú)投喂組對(duì)中國(guó)對(duì)蝦鰓CAT活力整體呈現(xiàn)促進(jìn)作用，但是差異不顯著。
　　 (4)不同濃度組對(duì)中國(guó)對(duì)蝦血清MDA表現(xiàn)出不同的抑制作用。單獨(dú)投喂蝦青素組整體呈現(xiàn)出對(duì)中國(guó)對(duì)蝦血清MDA活力先上升后下降的的趨勢(shì)，而混合投喂蝦青素和裂壺藻組血清MDA活力一直下降的趨勢(shì)。其下降趨勢(shì)不呈現(xiàn)一定的劑量關(guān)系，并且投喂蝦青素和裂壺藻個(gè)濃度組沒(méi)有明顯