紅鰭笛鯛和金焰笛鯛視蛋白的體外表達.pdf

1、學(xué)位論文答辯委更會組l l l巍貉～委員： 陽導(dǎo)師：奔星篙時間：島，鄉(xiāng)．易．≯ 釉l l ：》．t l ·了摘要紅鰭笛鯛( L u t j a n u se r y t h r o p t e r u s ) 和金焰笛鯛( L u t j a n u sf u l v i f l a m m a ) 隸屬于笛鯛科( L u t j a n i d a e ) 、笛鯛屬( L u t j a n u s B l o c h )

2、，屬于近海暖水性魚類，紅鰭笛鯛生活于為近底層而金焰笛鯛生活于淺水層，這兩種魚類都是經(jīng)濟價值比較的高捕撈品種。目前，國內(nèi)外對笛鯛屬魚類的研究集中在在養(yǎng)殖技術(shù)、病理研究、環(huán)境脅迫、系統(tǒng)發(fā)育等方面，在視蛋白基因方面的研究甚少。本論文以紅鰭笛鯛和金焰笛鯛為研究對象，對長波長敏感性視蛋白( L W S ) 和視桿蛋白( R H ) 進行原核載體構(gòu)建和真核表達，主要結(jié)果如下：1 、用特異性引物L(fēng) W S F ／R 擴增出紅鰭笛鯛目的基因L W S

3、全長，并克隆到p M D ．1 8 T 中，測序正確后，定向連接到原核表達載體p E T - 3 2 a 中，成功構(gòu)建紅鰭笛鯛L W S 基因的原核表達載體并命名為p E T - 3 2 a - L W S 。2 、用特異性引物Z L W S F ／R 擴增出兩種笛鯛的L W S 基因的開放閱讀框，克隆到p M D ．1 8 T 中，測序驗證后，定向連接到真核表達載體p P I C Z a A 中，成功構(gòu)建紅鰭笛鯛L W S 基因和金焰

4、笛鯛L W S 基因的真核表達載體并分別命名為p P I C Z a ．L W S ．L e r 和p P I C Z a —L W S —L m 。3 、用特異性引物Z R H F ／R 擴增出兩種笛鯛的R H 基因開放閱讀框，并克隆到p M D ．1 8 T 中，測序正確后，連接到真核的表達載體p P I C Z a A 中，經(jīng)驗證，成功構(gòu)建紅鰭笛鯛R H 基因和金焰笛鯛R H 基因的真核表達載體并分別命名為p P I C Z a

5、．R H ．L e r和p P I C Z a —R H —L m 。4 、將真核表達載體p P I C Z a —L W S - L e r 、p P I C Z a —L W S - L f u 、p P I C Z a ．R H ．L e r 以及p P I C Z a ．R H —L f u 經(jīng)S a cI 線性化后，電擊轉(zhuǎn)化進巴斯德畢赤酵母中，用甲醇3 0 o c 誘導(dǎo)，其中成功表達出目的蛋白紅鰭笛鯛L W S ，金焰笛鯛L