油菜黑脛病原Leptosphaeria biglobosa生物學(xué)特性及遺傳多樣性研究.pdf

1、油菜黑脛?。≒homastemcankerorblackleg）是一種世界性的油菜真菌病害，有弱毒（Leptosphaeriabiglobosa）和強(qiáng)毒（Leptosphaeriamaculans）兩種類型，每年都給世界油菜生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失。我國(guó)最早于1999年從油菜秸稈中發(fā)現(xiàn)弱侵染型病原菌Leptosphaeriabiglobosa。本研究對(duì)該病原菌進(jìn)行了生物學(xué)特性及遺傳多樣性的研究。具體研究成果如下:
　　1.從采自我國(guó)的油菜

2、秸稈上共分離獲得84株病原菌，鑒定結(jié)果顯示，采集到的84株黑脛病病原菌全部為L(zhǎng)eptosphaeriabiglobosa。
　　2.菌株的生物學(xué)特性為:該病原菌在5～35℃均可進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)并產(chǎn)孢，最適生長(zhǎng)和產(chǎn)孢溫度為25℃;在pH4～10的范圍內(nèi)該菌均能生長(zhǎng)并產(chǎn)孢，在pH7的條件下生長(zhǎng)最快，產(chǎn)孢最多。光照處理對(duì)該菌營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)無(wú)顯著影響，但對(duì)孢子產(chǎn)生有抑制作用;最適的碳源、氮源分別是可溶性淀粉、牛肉膏。分生孢子的致死溫度為52℃。

3、r>　　3.建立了適合LeptosphaeriabiglobosaISSR分子標(biāo)記的最佳反應(yīng)體系，即在25μL反應(yīng)體系中包含TaqDNA聚合酶1U，Mg2+2.0mmol/L，dNTPs0.2mmol/L，引物0.6μmol/L，模板40ng以及2.5μL10×buffer。
　　4.從110條引物中篩選出24條適于（Leptosphaeriabiglobosa）ISSR-PCR擴(kuò)增的引物，并確定了各引物的最佳退火溫度。經(jīng)對(duì)20株

4、病原菌的穩(wěn)定性檢測(cè)，證實(shí)該優(yōu)化體系可用于該病原菌遺傳多樣性的研究。
　　5.利用篩選出的24條引物對(duì)國(guó)內(nèi)外的99株病原菌進(jìn)行ISSR-PCR反應(yīng)，對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行聚類分析。在遺傳相似系數(shù)為0.65時(shí)，國(guó)內(nèi)菌株與國(guó)外菌株分成兩個(gè)居群，而且國(guó)內(nèi)菌株基本按地理來(lái)源聚為一個(gè)類群。
　　6.利用Popgene32軟件分析國(guó)內(nèi)六個(gè)省市菌株的居群結(jié)果表明:國(guó)內(nèi)各省菌株遺傳多樣性差異較小，省際間相比較，江蘇省菌株存在較大遺傳多樣性，順序?yàn)榻K