云南省煙草黑脛病菌遺傳多樣性研究.pdf

1、煙草是云南省主要經(jīng)濟(jì)作物之一，但是由煙草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）侵染引起的黑脛病，嚴(yán)重影響了煙葉的質(zhì)量與產(chǎn)量，阻礙了煙草農(nóng)業(yè)的正常發(fā)展。本文主要研究了云南主要植煙區(qū)的煙草黑脛病菌的表型性狀（生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量及致病力差異），以及從DNA分子水平上（線粒體基因間隔區(qū)）分析菌株間的遺傳多樣性，將其作為一個(gè)指標(biāo)，用來(lái)探索云南省煙草黑脛病遺傳分化的情況。
　　1）采集、分離云南省26個(gè)植煙區(qū)的煙草黑脛病菌菌株

2、，并將供試菌株分別接種于OA培養(yǎng)基上，記錄相同培養(yǎng)條件下各菌株在OA培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速率。結(jié)果表明，大部分菌株間的生長(zhǎng)速率差異并不顯著。通過(guò)人工誘導(dǎo)游動(dòng)孢子結(jié)果表明，菌株間的產(chǎn)孢量差異顯著。
　　2）致病性的測(cè)定作為研究煙草黑脛病菌不同地區(qū)菌系的一個(gè)重要的特性。本研究分別采用了室內(nèi)離體南瓜果實(shí)和紅大煙苗創(chuàng)傷接種26個(gè)煙草黑脛病菌菌株，分析各菌株間致病力差異。
　　南瓜片接種法接種結(jié)果表明，26個(gè)菌株均能使得南瓜片發(fā)病，南瓜片由

3、接種部位開(kāi)始向四周腐爛，并且南瓜片上會(huì)布滿一層白色的菌絲。顯著性差異分析（P＜0.05）各菌株病斑長(zhǎng)度差異，發(fā)現(xiàn)部分的菌株間存在顯著性差異。采用離差平方和系統(tǒng)聚類(lèi)分析法對(duì)各菌株進(jìn)行聚類(lèi)分析，可將26個(gè)菌株分為為5大類(lèi)。觀察聚類(lèi)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有些地理分布較遠(yuǎn)的菌株致病力不相同。
　　煙苗離體莖創(chuàng)傷接種法接種結(jié)果表明，26個(gè)黑脛病菌菌株菌也都能使得煙苗莖桿發(fā)病。病斑從接種處開(kāi)始向周邊擴(kuò)散，隨著接種時(shí)間的加長(zhǎng)，病斑從初期的水漬狀暗綠色漸漸轉(zhuǎn)

4、變?yōu)楹诤稚?。觀察發(fā)現(xiàn)，部分地區(qū)的菌株間病斑長(zhǎng)度存在顯著性差異現(xiàn)象。聚類(lèi)分析將26個(gè)菌分為五大類(lèi)。同南瓜片接種結(jié)果相比較發(fā)現(xiàn)，在南瓜上致病能力強(qiáng)的菌株，對(duì)煙苗的致病力并不一定強(qiáng)，出現(xiàn)了同一菌株對(duì)不同寄主表現(xiàn)出不同致病力的現(xiàn)象。
　　3）本研究基于線粒體的兩個(gè)基因間隔區(qū)（mt-IGS）分別分析云南省主要植煙區(qū)煙草黑脛病菌遺傳多樣性情況。
　　基于trnY/rns序列片段的遺傳多樣性分析結(jié)果：該基因間區(qū)具有明顯的 A/T偏向性。通

5、過(guò)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)6個(gè)變異位點(diǎn)，以堿基的轉(zhuǎn)換為主。核苷酸多樣性（Pi）為0.00101，單倍型多樣性（Hd）為0.353，26個(gè)菌株序列中共檢測(cè)出6種單倍型，其中H5單倍型屬于優(yōu)勢(shì)單倍型，包含21個(gè)菌株存在于該單倍型中，剩余的5種單倍型均屬于獨(dú)享型單倍型。菌株間的核苷酸平均遺傳距離為0.001，各單倍型間的平均遺傳距離為0.004?；趩伪缎偷姆肿影l(fā)育樹(shù)結(jié)果表明，可將獨(dú)享單倍型H4（魯?shù)榭h）單獨(dú)聚為一類(lèi)，剩余的5種單倍型聚為一類(lèi)。
　

6、　基于trnW/cox2序列片段的遺傳多樣性分析結(jié)果：同trnY/rns序列分析結(jié)果相一致，具有明顯的 A/T偏向性。26個(gè)菌株間的核苷酸多樣性（Pi）為0.00189，單倍型多樣性（Hd）為0.415。共檢測(cè)出7種單倍型，菌株間的核苷酸平均遺傳距離為0.002，各單倍型間的平均遺傳距離為0.004。H1屬于優(yōu)勢(shì)單倍型，包含20個(gè)菌株存在于該單倍型中，剩余的6個(gè)單倍型均屬于獨(dú)享型單倍型?；趩伪缎偷姆肿影l(fā)育樹(shù)結(jié)果表明，可將獨(dú)享單倍型H4