水稻白葉枯病菌遺傳多樣性分析.pdf

1、本研究利用國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的幾種IS-PCR和Rep-PCR引物、利用已知無(wú)毒基因序列自行設(shè)計(jì)引物、以及利用幾個(gè)與無(wú)毒基因相關(guān)片段為探針研究中國(guó)、日本和菲律賓水稻白葉枯病菌的遺傳多樣性與致病性之間的關(guān)系。
　　 首先以J3，IS1112，IS1113和ERIC為引物對(duì)來(lái)自中國(guó)、日本和菲律賓的水稻白葉枯病菌（Xanthomonas oryzae pv．oryzae）進(jìn)行遺傳多樣性分析。對(duì)114個(gè)參試菌系的PCR擴(kuò)增結(jié)果表明，參試菌系

2、表現(xiàn)出地域性差異。以70％為簇界，對(duì)4種引物擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行UPGMA綜合聚類，三個(gè)國(guó)家的菌系共分6個(gè)分子簇，1簇菌（60.5％）是三個(gè)國(guó)家菌系的主要分子簇，說(shuō)明大多數(shù)參試菌系之間的遺傳關(guān)系密切。對(duì)17組56株中國(guó)、日本和菲律賓的水稻白葉枯病菌母株和它們的單細(xì)胞系的研究結(jié)果表明：i）母株與單細(xì)胞系屬于同一分子譜型的比率依次為：52.9％（J3）、23.5％（IS1112）、29.4％（IS1113）和35.3％（ERIC）；ii）綜合4個(gè)引

3、物的PCR擴(kuò)增結(jié)果，采用UPGMA聚類，母株與單細(xì)胞系完全相同的，只有1組；以帶位相似率70％為簇界，參試菌可以劃分為7簇，來(lái)自中國(guó)、日本和菲律賓的12個(gè)組的母株和單細(xì)胞系聚合在同一簇中，占參試菌的70.6％，說(shuō)明三個(gè)國(guó)家病菌的母株和單細(xì)胞系在遺傳上存在高度相關(guān)性：但三個(gè)國(guó)家的病菌的母株與其單細(xì)胞系之間也存在簇群差異，如Pxo79組的母株和單細(xì)胞系各分在不同的3簇中，Pxo79，Pxo86，Pxo99和Pxo112等菌系的母株和單細(xì)胞之

4、間的差異率達(dá)到了41％；iii）致病性測(cè)定結(jié)果表明，中國(guó)、日本和菲律賓菌系的病原型分化明顯，菌系之間存在有明顯的致病性差異。同時(shí)參試的17組56個(gè)菌系的致病性測(cè)定結(jié)果表明，只有2組的母株和單細(xì)胞系的毒力相同，占11.8％。其余15組的母株和單細(xì)胞系的毒力存在致病性差異。
　　 其次，利用已知的水稻白葉枯病菌無(wú)毒基因以及致病相關(guān)基因序列，開展水稻白葉枯病菌株的毒力分化研究，獲得如下結(jié)果：
　　 3個(gè)HXA引物（HXA-9，

5、HXA-14，HXA-15），對(duì)19個(gè)來(lái)自中國(guó)、日本和菲律賓水稻白葉枯病菌系的基因組DNA進(jìn)行PCR分析。結(jié)果表明這19個(gè)參試菌株的基因組中都含有與我們引物設(shè)計(jì)所利用的無(wú)毒基因相關(guān)的同源片段。同時(shí)結(jié)果也表明利用小片段的無(wú)毒基因中的保守序列設(shè)計(jì)的引物，不能有效的區(qū)分菌株，而利用無(wú)毒基因的大片段設(shè)計(jì)的引物可以較好的區(qū)分不同國(guó)度的菌株。
　　 用3種不同的內(nèi)切酶（EcoRⅠ，XhoⅠ和HindⅢ）消化，以avrXa10和avrXa1O