馬鈴薯晚疫病菌快速分子檢測與群體遺傳多樣性分析.pdf

1、由致病疫霉（Phytophthora infestans）引起的馬鈴薯晚疫病是我國大多數(shù)馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)最具毀滅性的卵菌病害，該病嚴重發(fā)生時可造成絕收，同時在馬鈴薯貯藏期還可造成爛窖，是馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的巨大障礙。開發(fā)晚疫病菌快速分子檢測技術(shù)可以為檢查種薯晚疫病菌的帶菌率、晚疫病的早期診斷提供技術(shù)支撐，而對病菌群體遺傳多樣性的研究可為病菌群體演化和病害流行的科學(xué)測報提供理論依據(jù)，進而可有效地促進我國馬鈴薯產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。
　　1.建立了致

2、病疫霉實時熒光環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法。基于Ypt1基因設(shè)計了一套特異性引物，分別是兩條外引物F3、B3，兩條內(nèi)引物FIP、BIP，兩條環(huán)引物L(fēng)B、LF;優(yōu)化出了反應(yīng)體系，25μL反應(yīng)體系，內(nèi)引物1.2μM，外引物0.32μM，環(huán)引物0.68μM，dNTPs1.8mM，MgSO41.5mM，8U/μL Bst DNA聚合酶添加量3.2μL，10×ThermoPol Reaction Buffer添加量2.5μL，8 U/μL Bst DN

3、A聚合酶添加量為3.2μL，DNA模板添加量2μL，50×SYBR GreenⅠ添加量0.3μL，用ddH2O補足至25μL;該方法檢測靈敏度為371pg/μL，比普通PCR的靈敏度高10倍。
　　2.建立了致病疫霉實時熒光定量PCR檢測方法?；赮pt1基因設(shè)計了一套特異性引物;反應(yīng)體系為上下游引物各0.5μL，Bestar SybrGreen Qpcr mastermix10μL，ddH2O8μL。該方法靈敏度為1.9×103

4、copies/μL，即529ag/μL，比普通PCR檢測靈敏度高104倍。
　　3.測定了2015年采自東北和華北地區(qū)150株晚疫病菌的線粒體DNA單倍型，分析了2013年至2015年該區(qū)域450株晚疫病菌線粒體DNA單倍型的組成與變化。2015年，共檢測出ⅠR3，ⅠR2，ⅡR1，ⅡR3四種單倍型，與2013-2014年本實驗室東北和華北地區(qū)致病疫霉線粒體單倍型結(jié)果相比，ⅠR3、ⅡR3、ⅠR2在三年間穩(wěn)定存在。2015年出現(xiàn)了一種

5、新的線粒體單倍型ⅡR1。
　　4.測定了2015年采自東北和華北地區(qū)154株晚疫病菌的線粒體SSR基因型，分析了2013-2015年該454株晚疫病菌SSR基因型的組成與變化。擴增子在100～305bp范圍內(nèi)，等位基因的遺傳頻率分布0.0033～0.9933之間。2013年，152個致病疫霉菌株共29個等位基因，2014年148個致病疫霉菌株共23個等位基因，2015年154個致病疫霉菌株共23個等位基因，基因型分析結(jié)果表明，20