錦鯉和花鯽遠(yuǎn)緣雜交后代生物學(xué)特性研究.pdf

1、選用錦鯉和花鯽進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交,獲得了鯉鯽F1(錦鯉(♀)×花鯽(♂))和鯽鯉F1(花鯽(♀)×錦鯉(♂))兩個(gè)雜交魚群體。本文采用可數(shù)性狀測(cè)量、染色體制片、組織學(xué)切片及分子標(biāo)記檢測(cè)等技術(shù)對(duì)上述雜交魚的生殖細(xì)胞發(fā)育及相關(guān)遺傳特征進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,為魚類遠(yuǎn)緣雜交的遺傳育種研究提供了重要的生物學(xué)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾點(diǎn):
　　 1、對(duì)鯉鯽F1和鯽鯉F1及其父母本的外形特征進(jìn)行研究,用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法對(duì)它們的可量性狀、可數(shù)性狀進(jìn)行比較,

2、結(jié)果顯示:大多性狀介于父母本之間,顯示雜交性狀。也有的性狀在雜交后代中偏向母本,如在體高/體長(zhǎng)方面鯉鯽F1、體長(zhǎng)/全長(zhǎng)方面鯽鯉F1均偏向于母本；而在尾柄高/尾柄長(zhǎng)、頭高/體高、頭高/頭長(zhǎng)方面鯉鯽F1和鯽鯉F1均偏向于錦鯉,鯽鯉目的這些性狀受父本錦鯉影響較大。雜交后代體色具有多樣性,鯉鯽F1和鯽鯉F1中均存在金黃色個(gè)體,同時(shí)還有銀白色等其它顏色個(gè)體。
　　 2、以普通紅鯽(2n=100)作為對(duì)照,用流式細(xì)胞儀快速檢測(cè)鯉鯽F1、鯽鯉

3、F1代血細(xì)胞DNA相對(duì)含量。結(jié)果顯示:鯉鯽F1代全部為二倍體,鯽鯉F1代中二倍體與三倍體比例為4:1；利用腎細(xì)胞直接制片法對(duì)其染色體數(shù)目檢測(cè)表明,鯉鯽F1代染色體數(shù)目為100,鯽鯉F1代染色體數(shù)目為2n=100,3n=150；血涂片法觀察發(fā)現(xiàn)三倍體魚血細(xì)胞及其細(xì)胞核體積均為二倍體的1.5倍；有趣的是鯽鯉F1三倍體和母本花鯽一樣口角無(wú)須,而鯉鯽F1、鯽鯉F1二倍體口角均有須。
　　 3、精巢細(xì)胞直接制片法觀察發(fā)現(xiàn)大部分是染色體數(shù)目

4、為2n=100的分裂相,還有4n(200)、8n(400)的染色體分裂相。說(shuō)明1齡F1性腺中有2n、4n等多種精原細(xì)胞,推測(cè)其中4n的精原細(xì)胞有可能經(jīng)正常的減數(shù)分裂產(chǎn)生二倍體配子,若卵巢中也能產(chǎn)生二倍體卵子,在自交后代中就能得到四倍體魚,同時(shí)也可以和其他的鯽鯉二倍體配子結(jié)合,得到新型四倍體魚。
　　 4、通過(guò)石蠟切片觀察鯉鯽F1、鯽鯉F1(2n)、鯽鯉F1(3n)性腺顯微結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)鯉鯽F1、鯽鯉F1二倍體中均有卵巢型、精巢型和脂

5、肪型三種性腺。9月齡鯉鯽、鯽鯉卵巢型性腺中都能觀察到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞,發(fā)育好的精巢型性腺中能看到大量精細(xì)胞,鯽鯉F1中有部分精巢型性腺發(fā)育不好,只有極少數(shù)精細(xì)胞,觀察發(fā)現(xiàn)鯽鯉F1(3n)性腺發(fā)育異常。
　　 5、利用Sox基因分子標(biāo)記對(duì)鯉鯽和鯽鯉F1代二倍體和三倍體及其父母本進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明:鯉鯽、鯽鯉F1代二倍體和三倍體均擴(kuò)增出～200bp、～600bp、～900bp、～1900bp的條帶,在花鯽中只有～200bp、～

6、600bp和～1900bp擴(kuò)增帶,錦鯉中只存在～200bp和～900bp的兩條擴(kuò)增帶,鯉鯽F1和鯽鯉F1都兼有父母本的遺傳物質(zhì),從分子水平證明了其基因的異源性。克隆到的～900bp片段經(jīng)比對(duì)發(fā)現(xiàn)為Sox9b基因,以硬骨魚Sox9基因HMG-box序列構(gòu)建進(jìn)化樹,發(fā)現(xiàn)鯉鯽F1、鯽鯉F1與錦鯉、鯉魚和異源四倍體鯽鯉Sox9b聚在一起。同時(shí)對(duì)克隆得到的其他相關(guān)Sox基因序列,進(jìn)行了核苷酸和氨基酸序列的比對(duì),并進(jìn)行了生物信息學(xué)方面的分析。