珍稀瀕危植物大果木蓮遺傳多樣性的ISSR研究.pdf

1、大果木蓮（Manglietia grandis Hu et Cheng）是木蘭科（Magnoliaceae）木蓮屬（Manglietia Bl.）植物，僅零星分布于我國云南東南部及廣西西南部等局部地區(qū)，其種群數(shù)量日趨減少，瀕臨滅絕，已被列為國家二級重點(diǎn)野生保護(hù)植物和國家三級瀕危保護(hù)物種。然而，目前國內(nèi)外關(guān)于該物種的研究極少，基于此，本研究應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，對瀕危植物大果木蓮2個種群的遺傳多樣性進(jìn)行了分析，并同廣布近緣種中緬木蓮種

2、群的遺傳多樣性進(jìn)行對比，旨在為揭示大果木蓮這一珍稀瀕危植物致瀕的遺傳學(xué)可能原因和為其有效保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　 （1）采用單因素試驗(yàn)，測試了Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、5個因素對大果木蓮ISSR擴(kuò)增的影響，確立了在20μ L反應(yīng)體系中，含TaqDNA聚合酶0.5U、dNTP0.2mmol/L、引物0.8μmol/L、Mg2+2.0mmol/L、1×PCR buffer2.0μL、DN

3、A模板40ng。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，50-60℃退火45s（不同引物的退火溫度不同），72℃延伸2min，共40個循環(huán)：72℃延伸7min。
　　 （2）篩選出9條ISSR引物對2個大果木蓮種群和3個中緬木蓮種群基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，得到大小在120.1900bp之間的99條清晰顯帶，其中大果木蓮有51（PPB為51.52％）條呈多態(tài)性，應(yīng)用POPGENE軟件進(jìn)行分析，得到大果木蓮的Shanno

4、n信息指數(shù)（I）是0.2715，Nei’s基因多樣性指數(shù)（H）0.1830，這些指數(shù)在珍稀瀕危植物種屬于較高水平。近緣種中緬木蓮的基因多樣性稍高于大果木蓮，有68（PPB為68.69％）條呈多態(tài)性?；蚨鄻有詾?.2429，Shannon多樣性指數(shù)為0.3608。
　　 不同種群間的分化水平（Gst）為0.1561，表明總的遺傳變異中存在于種群間的只有15.61％，大部分的變異存在于種群內(nèi)部。這與中緬木蓮的情況相一致。
　

5、　 （3）根據(jù)ISSR結(jié)果構(gòu)建的系統(tǒng)樹，可以看出在大果木蓮的2種群間存在一定的遺傳分化，這與二者間較高的基因流相悖，這種情況的出現(xiàn)可能與大果木蓮種群的進(jìn)化歷史、適應(yīng)分化有關(guān)。另外，大果木蓮和中緬木蓮在遺傳上已有明顯的分化。根據(jù)ISSR結(jié)果構(gòu)建的系統(tǒng)樹，大果木蓮2個種群分為一支，中緬木蓮的3個種群分為另一支。
　　 （4）從研究結(jié)果看，大果木蓮的遺傳多樣性只稍低于中緬木蓮，在珍稀瀕危物種中多樣性也屬于較高水平，且種群的基因流較高