櫸樹遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、櫸樹(Zelkovaschneideriana)為國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)野生保護(hù)植物，是一種珍貴的用材樹種，具有重要的開發(fā)利用價(jià)值。近年來，櫸樹天然資源遭到嚴(yán)重破壞以致瀕危。遺傳多樣性的保護(hù)是生物多樣性保護(hù)的基礎(chǔ)，只有了解了櫸樹種群遺傳多樣性，才能建立合理的生物多樣性的保護(hù)策略，因此櫸樹遺傳結(jié)構(gòu)的研究對(duì)櫸樹資源的保護(hù)具有重要的意義。本研究以云南邱北、易門、師宗、雙柏和浙江平湖5個(gè)種群的櫸樹為對(duì)象，利用ISSR(InterSimpleSequenc

2、eRepeat)分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)各種群遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，其主要研究方法和結(jié)果如下： 1.采用CTAB法提取了櫸樹基因組DNA，所提取的DNA的質(zhì)量較高，經(jīng)檢測(cè)適于ISSR擴(kuò)增反應(yīng)。 2.建立了適于櫸樹ISSR擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系：總體積25μl，DNA模板20ng，10×buffer2.5μl，primer0.40μM，dNTPs0.25mM，TaqDNA聚合酶0.75U，MgCl21.8mM。擴(kuò)增反應(yīng)的程序?yàn)?/p>

3、：預(yù)變性，94℃5min；變性，94℃30s；退火，50℃45s；延伸，72℃2min，45個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min，4℃保存。 3.采用ISSR分子標(biāo)記對(duì)云南邱北、易門、師宗、雙柏和浙江平湖5個(gè)種群(每種群19個(gè)樣本)的櫸樹進(jìn)行了遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)研究。18條ISSR引物擴(kuò)增得到216個(gè)清晰的條帶，其中多態(tài)性條帶215個(gè)，多態(tài)性條帶百分率(PPB)為99.54％。POPGENE(Version1.32)軟件分析結(jié)果表明，邱

4、北種群的遺傳多樣性水平最高(PPB=88.43％，0.2605，Ho=0.4014)，其次是易門種群(PPB=86.11％，HE=0.2425，Ho=0.3759)，師宗、雙柏、平湖三個(gè)種群的多樣性水平相差較小。種群的遺傳結(jié)構(gòu)分析表明，總的遺傳變異中有80.28％的存在于種群內(nèi)，而各種群間的遺傳變異則占總變異的為19.72％。UPGMA聚類分析可知，易門和師宗種群的親緣關(guān)系最近，先聚合在一起，然后再依次與邱北、雙柏聚類，最后與平湖種群聚