靈寶大棗遺傳多樣性的表型與ISSR分析.pdf

1、靈寶大棗(Ziziphus jujuba‘Lingbaodazao')果實(shí)個(gè)大,糖分含量高,營(yíng)養(yǎng)豐富,是棗(Ziziphusjujuba Mill.)的一個(gè)優(yōu)良地方品種。靈寶大棗有栽培歷史悠久,在長(zhǎng)期的栽培過程中,由于氣候、土壤等自然條件和人類生產(chǎn)活動(dòng)的影響,其形態(tài)特征、生物學(xué)特征和品質(zhì)特征均發(fā)生了較大的變異,對(duì)靈寶大棗生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化和商品化產(chǎn)生了不利的影響,但同時(shí)也為從中選育優(yōu)良品系奠定了良好的基礎(chǔ)。本文采用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)標(biāo)記方法并結(jié)合技術(shù)

2、成熟穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)適用且多態(tài)性檢測(cè)水平高的ISSR標(biāo)記方法,對(duì)靈寶大棗群體的遺傳多樣性、遺傳學(xué)結(jié)構(gòu)及遺傳學(xué)關(guān)系進(jìn)行了研究,收集了一些優(yōu)良單株并進(jìn)行了嫁接實(shí)驗(yàn),為靈寶大棗新品種選育、種質(zhì)資源保護(hù)提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)70份靈寶大棗材料28個(gè)表型性狀的變異系數(shù)分析結(jié)果顯示:靈寶大棗14個(gè)植株性狀的平均變異系數(shù)為17.36％,平均方差為9.3267；8個(gè)果實(shí)外觀性狀的平均變異系數(shù)為25.29％,平均方差為15.1270

3、；6個(gè)果實(shí)主要內(nèi)含物性狀的平均變異系數(shù)為11.39％,平均方差為8.1293。表明在靈寶大棗表型總變異中果實(shí)的變異程度最高,植株變異程度居中,而內(nèi)含物最為穩(wěn)定,變異系數(shù)也最小。
　　 2.表型性狀的聚類分析結(jié)果表明:供試的70份材料可以分為3個(gè)群組,第一群組為大果型,為靈寶大棗的典型代表類型,第二群組為小果型和長(zhǎng)果型,在靈寶大棗中種類中比較稀少。第三組群僅有1株,形態(tài)特征多方面異于其他單株,可能是靈寶大棗的變異單株或者同名異物單

4、株。對(duì)靈寶大棗10個(gè)主要性狀的相關(guān)性分析結(jié)果表明:果形主要受到果橫徑變異的影響最大；單果重和內(nèi)含物含量的關(guān)系比較密切,內(nèi)含物各性狀之間的相關(guān)關(guān)系不明顯。
　　 3.改良后的SDS法提取的靈寶大棗基因組DNA,純度較好平均OD260/280值為1.77；平均得率為93.7gg/g；完整性好?？梢酝耆珴M足后期ISSR擴(kuò)增的需要。
　　 4.建立和適合靈寶大棗的ISSR-PCR反應(yīng)體系:總體積20μL,其中含模板DNA80ng

5、,引物濃度0.7gmol/L,2xTaq PCR MasterMix10.0μl,用無菌去離子水補(bǔ)足20μl。擴(kuò)增程序:94℃預(yù)變性5min,94℃變性30s,54℃(視引物而定)復(fù)性45s,72℃延伸75s,35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min,4℃保存,篩選出多態(tài)性較好的12條ISSR引物用于擴(kuò)增。
　　 5.共選出擴(kuò)增穩(wěn)定、多態(tài)性較好的引物12個(gè),對(duì)70份靈寶大棗基因組DNA進(jìn)行了擴(kuò)增,共擴(kuò)增出105個(gè)位點(diǎn),平均每引物擴(kuò)增位

6、點(diǎn)8.7個(gè),其中多態(tài)位點(diǎn)91個(gè),多態(tài)位點(diǎn)百分率86.67％,檢查到的等位基因數(shù)na=1.8667,有效等位基因數(shù)ne=1.5491,基因多樣性h=0.3183,香農(nóng)信息指數(shù)I=0.4725,說明70份靈寶大棗材料間存在著較高的遺傳變異。
　　 6.對(duì)靈寶大棗的群體遺傳結(jié)構(gòu)分析表明:靈寶大棗群體的基因多樣度Ht為0.3193,群體內(nèi)基因多樣度Hs為0.2828,群體間基因多樣度Dst為0.0365,基因分化系數(shù)Gst為O.1144

7、,說明僅有11.44％的變異來源于居群之間,而主要的遺傳變異來自群體內(nèi)的個(gè)體之間,基因流Nm為3.8717>1,說明居群間的基因流動(dòng)性較大,居群間的分化比較小。
　　 7.基于ISSR數(shù)據(jù)的聚類分析同基于表型的聚類分析的結(jié)果有所差異,但基本保持一致；主坐標(biāo)分析更加直觀地揭示靈寶大棗各材料之間的親緣關(guān)系；對(duì)遺傳距離和地理關(guān)系的相關(guān)系分析表明,遺傳距離和地理距離有著弱相關(guān)關(guān)系。
　　 8.綜合表型特征和分子生物學(xué)特征,從70