女貞種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、女貞(Ligustrum lucidum Ait.)系木犀科(Oleaceae)女貞屬(Ligustrum Linn.)常綠灌木或小喬木植物,是一種珍貴的苦丁茶代茶飲料植物和藥用植物,具有多種藥用價(jià)值和保健功能。目前,由于環(huán)境變化及人類(lèi)活動(dòng)等的影響,其遺傳多樣性有逐漸喪失的危險(xiǎn)。本試驗(yàn)利用ISSR分子標(biāo)記對(duì)女貞不同居群的種質(zhì)材料進(jìn)行了研究,分析了其遺傳多樣性和親緣關(guān)系,為后續(xù)的女貞育種工作和種質(zhì)資源保護(hù)等提供理論依據(jù)。
　　 為

2、從女貞葉片中獲得可供后續(xù)分子生物學(xué)操作的基因組DNA,針對(duì)其組織細(xì)胞中富含多糖、多酚、有機(jī)酸等物質(zhì)的特點(diǎn),采用改良CTAB法提取女貞基因組DNA。經(jīng)A26和A28值的測(cè)定,以及電泳檢測(cè)和PCR擴(kuò)增,結(jié)果表明改良CTAB法所提取的DNA無(wú)論在純度上、完整性上都比較好。
　　 采用單因子試驗(yàn)建立了一套適合于女貞的穩(wěn)定的ISSR-PCR反應(yīng)體系::25μl反應(yīng)體系中含10×buffer2.5μl,2.0～3.0 mmol.L-1 Mg

3、Cl2,150～300μmol·L-1dNTPs,1.0～1.5 U Taq酶,0.3～0.4μmol·L-1引物,5～320 ng DNA模板。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性4 min,94℃變性40 s,52～62℃(退火溫度隨引物不同而定)退火45 s,72℃延伸120 s,進(jìn)行35個(gè)循環(huán),最后72℃延伸8 min,4℃保存。
　　 篩選出了擴(kuò)增條帶清晰,穩(wěn)定性好的12條引物,對(duì)66份女貞種質(zhì)材料進(jìn)行檢測(cè),共擴(kuò)增出237個(gè)

4、位點(diǎn),平均每個(gè)引物擴(kuò)增出19.75個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)位點(diǎn)221個(gè),多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPB)為93.2％。DNA片段大小分布在150～2500bp之間。平均多樣性指數(shù)(I)為0.3151,遺傳相似系數(shù)(H)為0.2005,觀測(cè)等位基因數(shù)(Na)和有效等位基因數(shù)(Ne)分別為1.7222和1.3217。
　　 66份女貞種質(zhì)的遺傳相似性分析表明,絕大部分基因型間的Jaccard's相似系數(shù)在0.4～0.5之間。通過(guò)非加權(quán)算術(shù)平均數(shù)UP