油茶種質(zhì)資源多樣性的ISSR分析.pdf

1、運(yùn)用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系和從100條ISSR引物中篩選獲得的22條引物對(duì)98個(gè)油茶種質(zhì)資源（51個(gè)無(wú)性系種質(zhì)和雜交選育的47個(gè)種質(zhì)）的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)其產(chǎn)物的電泳條帶進(jìn)行多樣性分析，建立了這些油茶種質(zhì)資源的ISSR指紋圖譜，為油茶種質(zhì)資源的鑒定提供了理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了ISSR分析油茶種質(zhì)資源多樣性的反應(yīng)體系?？偟姆磻?yīng)體積25μl中，12.5μl2×Mix（包括DNA聚合酶、dNTPs和優(yōu)

2、化的反應(yīng)緩沖液）、2μl50ng/μl模板DNA、2μl0.6μmol/L引物、8.5μlddH2O;PCR程序?yàn)?94℃預(yù)變性5min;94℃變性45s，56℃退火45s，72℃延伸1min30s，39個(gè)循環(huán);72℃延伸7min，4℃保存。
　　2.運(yùn)用篩選獲得的22條引物，對(duì)不同地區(qū)的51個(gè)無(wú)性系油茶種質(zhì)資源的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物電泳后檢測(cè)，共獲得493個(gè)有清晰條帶的（可分析）位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)478個(gè)，多態(tài)性位點(diǎn)百

3、分率達(dá)96.78％，表明了油茶豐富的遺傳多樣性。根據(jù)NTSYS2.10和Winboot軟件計(jì)算51個(gè)油茶無(wú)性系種質(zhì)間的遺傳距離和步長(zhǎng)值，并繪制聚類(lèi)樹(shù)狀圖，可將其劃分為兩大類(lèi)群，即類(lèi)群Ⅰ（包含48個(gè)普通油茶種質(zhì)）和類(lèi)群Ⅱ（包含3個(gè)非普通油茶種質(zhì)），兩者相似系數(shù)（Gs）為0.620;類(lèi)群Ⅰ又可分為兩個(gè)亞類(lèi)群，相似系數(shù)（Gs）為0.634，其中Ⅰ-1皆為湖南種質(zhì)，Ⅰ-2包括部分湖南種質(zhì)和源自其他省份（地區(qū)）的普通油茶種質(zhì)。運(yùn)用POPGENE

4、version1.32軟件對(duì)不同地區(qū)油茶種質(zhì)（居群）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析表明，居群Shannon's信息指數(shù)（Ⅰ*）為0.3852、居群間基因多樣性（Ht）為0.2537、居群內(nèi)基因多樣性(Hs)為0.1555、居群間遺傳多樣性分化系數(shù)(Gst)為0.3967、居群間基因流（Nm*）為0.8262。湖南地區(qū)與其他地區(qū)居群間的Nei's遺傳距離依次為:云南居群＞福建居群＞貴州居群＞廣西居群＞江西居群＞湖北居群，表明地域距離越遠(yuǎn)，居群間遺傳距離越大

5、。因此，地理隔離可能是構(gòu)成油茶遺傳多樣性的重要基礎(chǔ)。
　　基于上述ISSR分析建立的DNA指紋圖譜，可有效地鑒別不同地區(qū)的51個(gè)油茶種質(zhì)資源。
　　3.同樣的22條ISSR引物分別對(duì)雜交組合HNDA-1×XL-F-183的13個(gè)ZB-8選育株系、XL-183-M1×XL-1的13個(gè)ZB-7選育株系和XL-183-M2×XL-1的21個(gè)ZB-9選育株系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后檢測(cè)，分別獲得359、387、382個(gè)條帶位

6、點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)分別為293、335、328個(gè)。多態(tài)性位點(diǎn)百分率分別為81.62％、86.56％和85.86％，均低于51個(gè)無(wú)性系種質(zhì)的多態(tài)性位點(diǎn)百分率96.78％。因此，來(lái)源于同一雜交組合的不同選育株系間雖然也表現(xiàn)出明顯的遺傳差異或遺傳多樣性，但比不同地區(qū)來(lái)源的無(wú)性系種質(zhì)間的遺傳多樣性要低。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，ZB-8系列、ZB-7系列和ZB-9系列的平均觀察等位基因數(shù)（Na*）分別為1.8162、1.8656、1.8586;有效等位

7、基因數(shù)（Ne*）分別為1.4835、1.4999、1.4502;基因多樣性（h*）分別為0.2834、0.2952、0.2717;居群Shannon's信息指數(shù)（Ⅰ*）分別為0.4256、0.4449、0.4150。
　　三個(gè)雜交組合的后代分別與其父、母本相比，其分子性狀皆出現(xiàn)廣泛分離，與父、母本形成明顯差異。因此，雜交育種是產(chǎn)生油茶遺傳多樣性的重要途徑之一。
　　另外，無(wú)性系穗條嫁接于種苗砧木或用于大樹(shù)換冠后，選育的新種質(zhì)