利用RAPD、ISSR標(biāo)記分析鄂西地區(qū)柚種質(zhì)資源遺傳多樣性.pdf

1、中國是柑桔的起源中心和遺傳變異中心之一,柚的品種資源十分豐富.該研究以分布在鄂西的柚種質(zhì)資源為對(duì)象,利用RAPD和ISSR分子標(biāo)記對(duì)其進(jìn)行研究,分析鄂西柚品種(類型)的遺傳多樣性.結(jié)果如下:1.對(duì)照常規(guī)RAPD和ISSR工作分析程序,在對(duì)鄂西柚種質(zhì)資源分析時(shí)作了部分調(diào)整,如DNA提取,PCR反應(yīng)體系等細(xì)節(jié).建立了一套適合于分析柚種質(zhì)資源的RAPD和ISSR反應(yīng)體系.該研究中建立的適合于柚種質(zhì)資源分析的RAPD最佳反應(yīng)體系為:DNA(20

2、ng/μL),引物(1μmol/L),MgCl<,2>(1.5mM),TaqDNA聚合酶1.5U,dNTPs(200μmol/L),PCR循環(huán)程序:94℃4min,一次循環(huán);94℃1min,35℃1min,72℃2min,40次循環(huán);72℃7min,一次循環(huán).ISSR最佳反應(yīng)體系為:DNA(20ng/μL),引物(1μmol/L),MgCl<,2>(2.0mM),TaqDNA聚合酶1.5U,dNTPs(200μmol/L);PCR循環(huán)程

3、序:94℃4min,一次循環(huán);94℃40s,48℃~56℃60s,72℃2min,30次循環(huán);72℃7min,一次循環(huán).2.從120條RAPD隨機(jī)引物中篩選出22條在樣品間具有多態(tài)性的引物,對(duì)鄂西柚種資源65份材料進(jìn)行RAPD分析,擴(kuò)增共產(chǎn)生207條RAPD標(biāo)記帶,其中多態(tài)性帶104條,多態(tài)性百分率為50.2﹪;從50條ISSR引物中共篩選出13條在所有樣品中均能產(chǎn)生清晰擴(kuò)增帶的ISSR引物,擴(kuò)增共產(chǎn)生136條ISSR標(biāo)記帶,其中多態(tài)性

4、帶82條,多態(tài)性百分率為60.3﹪.檢測效果表明,ISSR效果明顯優(yōu)于RAPD.2.根據(jù)RAPD和ISSR結(jié)果聚類分析,表明鄂西柚種資源單株間遺傳差異明顯.根據(jù)DNA標(biāo)記數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化遺傳距離矩陣所作UPGMA樹系圖表明,RAPD聚類結(jié)果和ISSR聚類結(jié)果均可將所有材料劃分為3大類群,3大類群內(nèi)聚集的柚類型間遺傳差異比較大,分化明顯.該地區(qū)內(nèi)沙田柚存在較大差異,長壽沙田柚的幾個(gè)類型和來自廣東、廣西的沙田柚類型聚類明顯比較分散,其地區(qū)性差異顯著