狼尾草屬牧草遺傳多樣性的RAPD和ISSR分析.pdf

1、以福州、建陽兩個地區(qū)的45份狼尾草屬牧草的幼嫩葉片為材料,研究了RAPD-PCR和ISSR-PCR反應條件;并應用RAPD和ISSR分子標記對45份狼尾草屬牧草遺傳多態(tài)性、親緣關系等進行分析,結果表明:
　　 1、單因素結合正交試驗設計優(yōu)化得到狼尾草屬牧草優(yōu)化的RAPD-PCR和ISSR反應體系。RAPD-PCR優(yōu)化的最終體系為:總體積為20μL,反應體系中含有1.5μL(25mmol/1)Mg2+、0.4μL dNTPs(10

2、mM)、1.2μL primer(10pM)、0.4μLTaq DNA Polymerase(5U/μL)、2.0gL10xPCR Buffer、2.0μL DNA,加ddH2O補足到20μL;優(yōu)化的ISSR-PCR體系為:總體積為25μL,含有1.5μL Mg2+(25mM)、0.3μL dNTPs(10mM)、1.5μL primer(10pM)、0.4μL Taq DNA Polymerase(5U/μL)、2.5μL10×PCR

3、 Buffer、2.0μL DNA,ddH2O補足到25μL。
　　 2.分別從100條RAPD引物和100條ISSR引物中篩選出8條RAPD引物和9條ISSR引物用于RAPD和ISSR分析。8條RAPD引物共檢測到70個位點,其中多態(tài)位點占88.57％,Nei's基因多樣度為0.3080,Shannon信息指數(shù)為0.5334;9條ISSR引物共檢測到83個位點,其中多態(tài)位點占92.77％,Nei's基因多樣度為0.2832,S