黃皮遺傳多樣性的RAPD分析.pdf

1、黃皮屬(Clausena Burm)植物種類較多,全世界約30余個(gè)種,其中11個(gè)種原產(chǎn)中國(guó)。黃皮為中國(guó)種,其栽培品種主要有大雞心、選種大雞心、長(zhǎng)雞心、郁南無(wú)核、獨(dú)核甜、岐山甜、從城甜、紅嘴雞心、白糖雞心、龍山無(wú)核、廣西無(wú)核等。目前各地栽培的黃皮品種頗多,但不少同物異名或同名異物,由于地理分布的重疊和種類間的自然雜交,產(chǎn)生了多種中間過(guò)渡類型,使其種內(nèi)品種的界線不清晰。
　　 本研究以89份黃皮種質(zhì)為試驗(yàn)材料,利用RAPD技術(shù)對(duì)不同

2、的黃皮種質(zhì)進(jìn)行分子水平的比較分析,通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析做出聚類分析圖,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)部分種質(zhì)進(jìn)行染色體倍性分析,研究黃皮種質(zhì)的遺傳多樣性和各種質(zhì)相互之間的親緣關(guān)系,為黃皮種質(zhì)資源的起源和分類提供科學(xué)依據(jù),也為今后更好地服務(wù)于黃皮遺傳育種、優(yōu)良品種鑒定以及黃皮種質(zhì)資源保存等方面提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀的檢測(cè),白糖甜黃皮、早熟甜黃皮、早熟黃糖黃皮、鷹嘴黃皮、獨(dú)核黃皮Ⅰ、獨(dú)核黃皮Ⅱ、小果長(zhǎng)

3、雞心黃皮均為二倍體,而廣西無(wú)核黃皮、郁南無(wú)核黃皮為三倍體。
　　 2、利用改良的CTAB法提取DNA,質(zhì)量和濃度采用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)測(cè)定。OD260/OD280在1.7-1.9之間,較純,可用于RAPD-PCR擴(kuò)增。
　　 3、確定了黃皮的RAPD反應(yīng)體系為:1.0 U Taq DNA聚合酶、2.5 mmol/L Mg2+、0.5μmol/L隨機(jī)引物、50 ng模板DNA、0.20 mmol/L dNTPs

4、,剩下的用ddH2O來(lái)補(bǔ)充。確定了適合黃皮的RAPD反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性3 min,94℃變性45 s,36℃退火45 s,72℃延伸1 min,38個(gè)循環(huán)；72℃后延伸7 min,4℃保存。
　　 4、從80個(gè)10堿基隨機(jī)引物中篩選出18個(gè)擴(kuò)增譜帶清晰且穩(wěn)定的引物,用這些引物對(duì)89份種質(zhì)進(jìn)行擴(kuò)增,均具有多態(tài)性,共擴(kuò)增出156條帶,其中102條具有多態(tài)性,多態(tài)性比例為65.4％。Shannon多樣性信息指數(shù)(Ⅰ)為0.6

5、677,基因多樣性(Ht)為0.4751。
　　 5、對(duì)89份黃皮種質(zhì)進(jìn)行了RAPD擴(kuò)增,根據(jù)相似系數(shù)進(jìn)行了聚類分析,依相似系數(shù)0.821的水平,可以將其分為4大類,具體情況如下:Ⅰ類:早熟甜黃皮、遲熟甜黃皮、廣西無(wú)核、廣西雜交黃皮、大葉長(zhǎng)雞心等,主要是廣東、廣西的54份種質(zhì)；Ⅱ類:瓊Ⅰ號(hào)～14號(hào)黃皮、揭陽(yáng)無(wú)核、龍山無(wú)核、廣西圓皮、陽(yáng)山雞心,主要是海南省種質(zhì)；Ⅲ類:郁南無(wú)核Ⅰ、從城黃皮Ⅲ、大雞心Ⅰ、選種大雞心、雞心黃皮Ⅳ、廣西小