鹽地堿蓬遺傳多樣性的RAPD和ISSR分析.pdf

1、鹽地堿蓬(Suaedasalsa)是藜科堿蓬屬(Suaeda)一年生草本植物.鹽地堿蓬抗逆性強(qiáng),尤以抗鹽能力最為突出,能在含鹽4.3﹪以下的海水澆灌下成活,并且富含多種營(yíng)養(yǎng)及藥用成分.目前對(duì)鹽地堿蓬抗逆特別是抗鹽機(jī)制的研究已經(jīng)深入到生化及分子水平,但是鹽地堿蓬的保護(hù)和利用工作缺乏來(lái)自遺傳多樣性研究的科學(xué)依據(jù)和理論指導(dǎo).本研究針對(duì)目前鹽地堿蓬遺傳多樣性研究缺乏的現(xiàn)狀,運(yùn)用RAPD、ISSR兩種分子標(biāo)記方法,在山東東營(yíng)按照土壤鹽堿程度的差別

2、選取了不同生境鹽地堿蓬的8個(gè)自然居群,通過(guò)對(duì)鹽地堿蓬自然居群的遺傳多樣性研究,揭示了鹽地堿蓬物種的遺傳多樣性水平和鹽地堿蓬居群的遺傳變異和遺傳結(jié)構(gòu),并揭示了鹽地堿蓬居群間的遺傳分化與其生境有一定關(guān)系,為合理開(kāi)發(fā)和有效利用鹽地堿蓬資源提供科學(xué)的指導(dǎo)和依據(jù).本研究獲得以下結(jié)果:1.建立了鹽地堿蓬RAPD反應(yīng)體系和ISSR.反應(yīng)體系,均采用25μL反應(yīng)體系.RAPD反應(yīng)體系:含30～50ng DNA,1.0μmol/L引物,2.5μl 10×

3、PCR Buffer(100mmol/LTris-HClPH8.4,500mmol/L KCl,15mmol/L MgCl<,2>,1mg/ml BSA),0.2mmol/LdNTPs,lU Taq酶.ISSR反應(yīng)體系:含約50ng DNA,0.5μmol/L引物,10×PCR Buffer,2.0 mmol/LMgCl<,2>,0.2 mmol/L dNTPs,lU Taq酶.RAPD反應(yīng)程序?yàn)?使用94℃預(yù)變性2min:接45個(gè)循環(huán)

4、,每個(gè)循環(huán)94℃,lmin;36℃,lmin;72℃,2min;再接72℃延伸10min,擴(kuò)增完后置于4℃保存.ISSR擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性2 min;接著進(jìn)行35個(gè)循環(huán):94℃變性.50s,50℃退火45s,72℃延伸1.5min,循環(huán)結(jié)束后72℃延伸5min:擴(kuò)增完后置于4℃保存.2.應(yīng)用RAPD、ISSR兩種分子標(biāo)記方法揭示了鹽地堿蓬物種的遺傳多樣性水平:多態(tài)位點(diǎn)百分?jǐn)?shù)(P)分別為:RAPD-89.43﹪,ISSR:86.76﹪

5、;Nei's基因多樣性指數(shù)(H)分別為:RAPD:0.3264,ISSR:0.2815:Shannon多態(tài)性信息指數(shù)(I)分別為:RAPD:0.4854,ISSR:0.4291.兩種分子標(biāo)記的數(shù)值相差不大,均揭示了鹽地堿蓬物種具有較高的遺傳多樣性水平.RAPD和ISSR都是評(píng)估鹽地堿蓬遺傳多樣性水平有效的分子標(biāo)記方法.3.Nei's遺傳多樣性分析和AMOVA分析所揭示的鹽地堿蓬8個(gè)自然居群間的遺傳分化水平表明,各居群間存在一定的遺傳分化

6、.遺傳變異主要存在于居群內(nèi)(Gst值:RAPD:0.2359,ISSR:0.2811).鹽地堿蓬的基因流較大(Nm值:RAPD:1.6196,ISSR:1.2789),說(shuō)明鹽地堿蓬各居群間有一定的基因交流.4.利用POPGENE得到的遺傳一致度(I值:RAPD:0.7855～0.9276,平均為0.8826;ISSR:0.7879～0.9583,平均為0.8868)和遺傳距離(D值:0.0752～0.2414之間,平均為0.1536;I