青島文昌魚遺傳多樣性的RAPD分析.pdf

1、文昌魚作為脊索動物門頭索動物亞門幸存物種,在中國主要分布在廈門、青島等少數(shù)海域,被國家列為二級瀕危保護動物,有重大的學(xué)術(shù)價值和一定的經(jīng)濟價值.因此,有必要對它的遺傳背景進行詳細的了解,為制定有效的保護措施提供科學(xué)的依據(jù).該實驗首次采用隨機擴增多態(tài)DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)技術(shù)對青島文昌魚該群體雌雄各11條個體共22個樣本進行遺傳多樣性檢測.提取文昌魚基因組DNA后經(jīng)過預(yù)備性實驗,

2、優(yōu)化PCR擴增反應(yīng)條件,確定PCR反應(yīng)參數(shù).從40個10bp的寡聚核苷酸隨機引物(OPC、OPA各20個)中篩選出17個擴增重復(fù)性好,條帶清晰、特異性強、數(shù)量豐富的引物,對每個個體基因組DNA進行了擴增.得到RAPD產(chǎn)物的分子量在200-2200bp之間,產(chǎn)物總計127條譜帶.其中,多態(tài)位點60個(占47.24％),單態(tài)位點67個(占52.76％).各引物檢測到的RAPD位點數(shù)在4-11之間.計算其個體間遺傳相似系數(shù)平均為0.8656,

3、遺傳距離平均為0.1344.平均雜合度為0.1165.表明青島文昌魚群體遺傳多樣性水平較低.在文昌魚雌雄個體RAPD產(chǎn)物中,2個電泳圖譜上均能讀出明顯的雌雄差異帶.記錄為OPC-07<,250>和OPC-12<,250>.估計可能與雄性文昌魚具有異型性染色體有關(guān).這與XY型性別決定機制相吻合.將11條文昌魚雌性個體和11條文昌魚雄性個體分別作為兩個群體來研究.進一步篩選出11個引物對雌雄群體混合DNA樣本進行擴增.結(jié)果表明:在個體間具有