青島文昌魚SRA基因的克隆、表達(dá)及進(jìn)化分析.pdf

1、文昌魚屬于脊索動物門中的頭索動物亞門，處于由無脊椎動物到脊椎動物的過渡位置。作為從無脊椎動物到脊椎動物過渡階段的典型動物，文昌魚一直是研究動物進(jìn)化和胚胎發(fā)育的模式動物。SRA基因是一種類固醇激素受體的轉(zhuǎn)錄輔激活因子，也是首次發(fā)現(xiàn)的可以從RNA和蛋白質(zhì)兩個水平上發(fā)揮作用的分子。目前，對SRA基因的研究主要集中在在脊椎動物中,而在進(jìn)化上占據(jù)關(guān)鍵位置的文昌魚中是否存在SRA基因還不清楚。
　　本論文首先通過5’-RACE技術(shù)克隆了青島文

2、昌魚SRA基因，命名為AmphiSRA。AmphiSRA基因序列全長1542 bp，含有一個525 bp的最大開放閱讀框(ORF),編碼有174個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，推測其分子量約為19.5 kDa。5’端含有一段165 bp的非翻譯區(qū)(UTR)，3’端含有一段852 bp的非翻譯區(qū)。序列經(jīng)NCBI BLASTP程序比對，發(fā)現(xiàn)其具有完整的SRA基因家族編碼框。
　　利用Northern雜交的方法，對AmphiSRA基因是否在青島文

3、昌魚中存在和大小進(jìn)行了鑒定。雜交結(jié)果顯示出三條條帶，大小分別約為4 kb,1.6 kb和500 bp，我們得到的cDNA與其中一條大小一致。利用整體原位雜交檢測文昌魚的成體切片以及各時期的胚胎發(fā)現(xiàn)，AmphiSRA廣泛分布于文昌魚各個組織中，在脊索、神經(jīng)索、鰓、腸以及卵巢和精巢中表達(dá)尤其明顯，并且胚胎和成體中的表達(dá)情況一致。
　　AmphiSRA是否屬于表達(dá)蛋白質(zhì)類型，通過構(gòu)建原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)來解決這一問題。通過