文昌魚(yú)Bf-C2基因的克隆、表達(dá)與進(jìn)化分析.pdf

1、文昌魚(yú)屬于脊索動(dòng)物門(mén)頭索動(dòng)物亞門(mén)，長(zhǎng)久以來(lái)一直被認(rèn)為是現(xiàn)存的與脊椎動(dòng)物親緣關(guān)系最近的無(wú)脊椎動(dòng)物。其形體結(jié)構(gòu)、發(fā)育模式和基因組都代表了脊椎動(dòng)物最簡(jiǎn)單的模式，為研究脊椎動(dòng)物免疫的起源和免疫基因的進(jìn)化提供了一個(gè)最理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。雖然缺乏類似脊椎動(dòng)物的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，文昌魚(yú)仍然能夠在多種生存環(huán)境下健康生長(zhǎng)，繁殖后代，它們的成功很大的程度上依賴于其有效的先天性免疫系統(tǒng)。補(bǔ)體系統(tǒng)是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，是一個(gè)復(fù)雜的限制性蛋白水解系統(tǒng)。補(bǔ)

2、體成分可以通過(guò)經(jīng)典途徑、替代途徑以及凝集素途徑活化。補(bǔ)體B因子又稱C3激活劑前體，是補(bǔ)體替代激活途徑的關(guān)鍵酶之一，主要由肝臟合成。B因子及其同源基因的克隆在人、黑猩猩、鼠、非洲爪蟾、斑馬魚(yú)、七鰓鰻、海鞘、海膽、鱟、?？葎?dòng)物中都有報(bào)道，而且已有實(shí)驗(yàn)表明文昌魚(yú)存在補(bǔ)體替代途徑，但文昌魚(yú)B因子基因的克隆及其進(jìn)化分析迄今未見(jiàn)報(bào)道。本論文主要利用分子生物學(xué)方法，克隆得到文昌魚(yú)具有完整編碼框的B因子eDNA全長(zhǎng)，并對(duì)B因子的表達(dá)和功能進(jìn)行分析。文

3、昌魚(yú)B因子cDNA全長(zhǎng)2362bp，開(kāi)放閱讀框2259bp，編碼752個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)(理論蛋白分子量為82.6KDa)。文昌魚(yú)B因子為嵌合蛋白，結(jié)構(gòu)域組成為CCP-EGF-CA-CCP-CCP-vWFA-SP，與哺乳動(dòng)物B因子結(jié)構(gòu)域相比在結(jié)構(gòu)域CCP1與結(jié)構(gòu)域CCP2之間另外具有一個(gè)EGF CA結(jié)構(gòu)域，是Bf/C2家族的一個(gè)新成員。熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示文昌魚(yú)受脂多糖(LPS)刺激后，其肝盲囊中BbBf/C2表達(dá)量迅速升高且持續(xù)維