小葉滿江紅內(nèi)生菌多樣性的T-RFLP分析.pdf

1、滿江紅(Azolla spp.)又俗稱紅萍、綠萍，是滿江紅科滿江紅屬的水生蕨類植物，其葉腔內(nèi)常有藍藻與其共生，有較強的固氮能力。在我國廣泛用作稻田綠肥和飼料。植物內(nèi)生菌指生活史中某一階段或全部階段生活在植物組織內(nèi)，對植物沒有引起明顯病害癥狀的一類微生物。自1964年Grilli通過電子顯微鏡觀察，最早描述紅萍內(nèi)共生菌的存在以來，紅萍內(nèi)生菌的研究就快速發(fā)展起來。隨著科學的進步和相互滲透，許多先進的科學技術(shù)手段運用到植物內(nèi)生菌的研究中，使得

2、內(nèi)生菌的研究更加趨于合理和客觀。T-RFLP技術(shù)是近年來發(fā)展起來的不依賴于培養(yǎng)的微生物群落多樣性的分析方法之一。本文以無藻小葉萍為材料，利用T-RFLP技術(shù)對其內(nèi)生細菌、真菌、古細菌的群落結(jié)構(gòu)進行了研究，結(jié)合傳統(tǒng)平板培養(yǎng)方法，比較全面、系統(tǒng)地揭示了小葉萍中內(nèi)生菌的表型多態(tài)性和遺傳多樣性，為闡明內(nèi)生菌在紅萍-藍藻共生體的系統(tǒng)發(fā)育和協(xié)同進化中的作用提供科學依據(jù)。 本研究采用CTAB法直接從植物組織中抽提包括內(nèi)生菌DNA在內(nèi)的總DNA

3、，并用密度梯度離心法獲得小葉萍內(nèi)生菌菌群，對總DNA和菌群分別進行PCR擴增和平板培養(yǎng)。以細菌、古細菌的16S rDNA、真菌的ITS序列為靶基因，使用熒光引物進行PCR擴增，得到目的條帶。分別對其PCR產(chǎn)物進行HhaI和MspI的酶切消化，T-RFs使用GeneMarker()軟件處理。經(jīng)RDP數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn)了10種細菌和97種古細菌，同時也證明了內(nèi)生真菌的存在。傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)方法對小葉萍組織中的內(nèi)生菌進行分離培養(yǎng)，得到的菌株分離結(jié)果